作者ennnnno (伊諾)
看板Biotech
標題[討論] vector切完之後
時間Fri Oct 7 12:29:55 2011
昨天晚上切vector
因為只有一個EcoRI的切點
所以切了overnight
今天做了CIP
想請問如果沒有馬上做gel elution的話
放到星期一才純化可以嗎??
另外,切vector後一定要跑長膠check嗎
還是短膠就可以了??
謝謝~
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◆ From: 140.116.94.249
1F：推 HEK293:要馬EDTA+heat inactivate，不然就先跑膠，晚一點elute 10/07 13:04
2F：→ ennnnno:請問是膠的話就直接放在enpendoff裡加水保存就可以放久 10/07 13:14
3F：→ ennnnno:一點了嗎謝謝 10/07 13:14
4F：→ nike77114:過clean up然後保留在TE buffer比較穩吧(喔當然一定要65 10/07 13:33
5F：→ nike77114:度C 讓酵素失活喔!!) 10/07 13:33
6F：→ nike77114:應該說在你CIP處理完後就應該要讓酵素失活了@@ 10/07 13:34
7F：→ ennnnno:有喔,已失活了,只是在想需要跑很久的長膠嗎?學長說要六小 10/07 14:31
8F：→ ennnnno:時! 10/07 14:32
9F：→ nike77114:不太了解為什麼要跑長膠耶?為了要check什麼? 10/07 16:16
10F：→ nike77114:這方面我就不太熟了 10/07 16:16
11F：→ yaliu:可能要讓你跑遠一點，比較不會切到未切部份吧 10/07 16:18
12F：→ yaliu:elution的時候......。CIP完不處理也還好，切完再elution也 10/07 16:19
13F：→ nike77114:樓上大大可以解釋一下嗎@@? 10/07 16:19
14F：→ yaliu:可以～～他是DNA還蠻穩定的，冰冰箱就好了 10/07 16:19
15F：→ nike77114:跑遠一點是? 10/07 16:19
16F：→ yaliu:就是你現在只切一刀，基本上片段很大，怕circular跟linear 10/07 16:21
17F：→ yaliu:很近～～切膠可能會切到未被作用的質體，我猜的拉～～ 10/07 16:21
18F：→ yaliu:不過長膠的意思是什麼我還真是不了解就是了... 10/07 16:22
19F：→ ennnnno:因為其實切一刀感覺要從膠上看出來有無差異性我覺得很難>< 10/07 16:24
20F：→ ennnnno:所以我就偷懶的只跑了短膠,然後elute.... 10/07 16:24
21F：推 yaliu:跑遠一點會比較保險拉～就跑一個未切一個有切，這樣比較好看 10/07 16:26
22F：推 bluecsky:要分circular跟linear其實跟跑的速度比較有關.. 10/07 17:18
23F：→ bluecsky:你電壓都開80 100v去跑 跑長膠也還是黏在一起 10/07 17:19
24F：→ bluecsky: 不過正確說法是 v/cm這比例 膠夠長 同電壓這比例就會降 10/07 17:19
25F：→ bluecsky:好吧 其實定電壓下 跑長膠好像也是對的 (錯亂了 抱歉) 10/07 17:20
26F：推 mattmatt:另外以現代的EcoRI效率 切o/n之後應該不會再有沒切開的吧 10/08 01:32
27F：→ mattmatt:我也想知道跑6hr長膠的目的是甚麼 10/08 01:33
28F：→ nike77114:據我之前問老闆的說法是，這個方法以前人蠻常用的 10/11 00:18
29F：→ nike77114:似乎是可以分circular跟linear form的vector 10/11 00:18