作者ennnnno (伊诺)
看板Biotech
标题[讨论] vector切完之後
时间Fri Oct 7 12:29:55 2011
昨天晚上切vector
因为只有一个EcoRI的切点
所以切了overnight
今天做了CIP
想请问如果没有马上做gel elution的话
放到星期一才纯化可以吗??
另外,切vector後一定要跑长胶check吗
还是短胶就可以了??
谢谢~
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.116.94.249
1F：推 HEK293:要马EDTA+heat inactivate，不然就先跑胶，晚一点elute 10/07 13:04
2F：→ ennnnno:请问是胶的话就直接放在enpendoff里加水保存就可以放久 10/07 13:14
3F：→ ennnnno:一点了吗谢谢 10/07 13:14
4F：→ nike77114:过clean up然後保留在TE buffer比较稳吧(喔当然一定要65 10/07 13:33
5F：→ nike77114:度C 让酵素失活喔!!) 10/07 13:33
6F：→ nike77114:应该说在你CIP处理完後就应该要让酵素失活了@@ 10/07 13:34
7F：→ ennnnno:有喔,已失活了,只是在想需要跑很久的长胶吗?学长说要六小 10/07 14:31
8F：→ ennnnno:时! 10/07 14:32
9F：→ nike77114:不太了解为什麽要跑长胶耶?为了要check什麽? 10/07 16:16
10F：→ nike77114:这方面我就不太熟了 10/07 16:16
11F：→ yaliu:可能要让你跑远一点，比较不会切到未切部份吧 10/07 16:18
12F：→ yaliu:elution的时候......。CIP完不处理也还好，切完再elution也 10/07 16:19
13F：→ nike77114:楼上大大可以解释一下吗@@? 10/07 16:19
14F：→ yaliu:可以～～他是DNA还蛮稳定的，冰冰箱就好了 10/07 16:19
15F：→ nike77114:跑远一点是? 10/07 16:19
16F：→ yaliu:就是你现在只切一刀，基本上片段很大，怕circular跟linear 10/07 16:21
17F：→ yaliu:很近～～切胶可能会切到未被作用的质体，我猜的拉～～ 10/07 16:21
18F：→ yaliu:不过长胶的意思是什麽我还真是不了解就是了... 10/07 16:22
19F：→ ennnnno:因为其实切一刀感觉要从胶上看出来有无差异性我觉得很难>< 10/07 16:24
20F：→ ennnnno:所以我就偷懒的只跑了短胶,然後elute.... 10/07 16:24
21F：推 yaliu:跑远一点会比较保险拉～就跑一个未切一个有切，这样比较好看 10/07 16:26
22F：推 bluecsky:要分circular跟linear其实跟跑的速度比较有关.. 10/07 17:18
23F：→ bluecsky:你电压都开80 100v去跑 跑长胶也还是黏在一起 10/07 17:19
24F：→ bluecsky: 不过正确说法是 v/cm这比例 胶够长 同电压这比例就会降 10/07 17:19
25F：→ bluecsky:好吧 其实定电压下 跑长胶好像也是对的 (错乱了 抱歉) 10/07 17:20
26F：推 mattmatt:另外以现代的EcoRI效率 切o/n之後应该不会再有没切开的吧 10/08 01:32
27F：→ mattmatt:我也想知道跑6hr长胶的目的是甚麽 10/08 01:33
28F：→ nike77114:据我之前问老板的说法是，这个方法以前人蛮常用的 10/11 00:18
29F：→ nike77114:似乎是可以分circular跟linear form的vector 10/11 00:18