作者clock0706 (只有手指了解女生的寂寞)
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標題[求救] 用96孔盤做MTT assay
時間Sat Oct 1 15:26:22 2011
想請問各位實驗室用96孔盤做MTT是很常見嗎??
因為我們家實驗室最近改用96孔盤來做MTT assay
可是這幾次實驗下來數據都不太好...
之前的做法是將 "sample做成適當的大小放入24孔盤" 中
每個well seeding 5000顆細胞 時間點 1.3.5.7.9 天
每個時間點加入MTT反應完都會有明顯的藍紫色結晶
再加DMSO之後測570nm的OD值最高都會有2左右
可是現在做法換成將 "sample浸泡在medium裡24小時後當萃取液"
先在96孔盤中 每well seeding 6000顆 "培養24小時後換成萃取液"
時間點也是1.3.5.7.9天
可是當加入MTT反應完之後都沒有藍紫色結晶出現 DMSO加入後的顏色也很淡...
570nm測出來的OD值都0.2左右 跟之前比較實在差很多
想請問說 1.以96well的大小培養細胞 大概幾天就會長滿??
我實驗的時間點是否過長?
2.另外我用雙氧水來當作positive control 來殺細胞是否OK?
還是有其他更適合的藥物??
請大家多多指教 感謝~~
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 203.71.94.5
1F：→ f9361046:第一個問題 因該要看是什麼細胞吧... 10/01 17:58
2F：→ f9361046:時間是否過長 因該看你實驗目的為何吧 10/01 17:59
3F：推 a900535:有沒有用顯微鏡觀察細胞呢？ 10/01 22:48
4F：→ a900535:培養液換成萃取液的過程有沒有做會讓細胞大量流失掉的動作 10/01 22:49
5F：→ clock0706:細胞株是MG-63 平常10cm dish 大概3-4天繼代 10/01 23:55
6F：→ clock0706:時間點做長是想看細胞從少到多 再來就是滿了之後開始死 10/01 23:56
7F：→ clock0706:亡的曲線 10/01 23:56
8F：→ a001ou:24well只種5000太少了吧 96種6000到是太多了 10/02 00:47
9F：→ a001ou:若要培養長達9天還是改回24Well 5000細胞吧 10/02 00:48
10F：→ Tendin1015:我們都是用96在做MTT..有一點你要注意的是細胞數。 10/02 04:04
11F：→ Tendin1015:像我實驗的細胞可以到50000顆，要先知道你用什麼細胞。 10/02 04:07
12F：推 birdddd:細胞數要看細胞株而決定 我們是細胞貼了之後就做處理耶 10/03 17:53