作者clock0706 (只有手指了解女生的寂寞)
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标题[求救] 用96孔盘做MTT assay
时间Sat Oct 1 15:26:22 2011
想请问各位实验室用96孔盘做MTT是很常见吗??
因为我们家实验室最近改用96孔盘来做MTT assay
可是这几次实验下来数据都不太好...
之前的做法是将 "sample做成适当的大小放入24孔盘" 中
每个well seeding 5000颗细胞 时间点 1.3.5.7.9 天
每个时间点加入MTT反应完都会有明显的蓝紫色结晶
再加DMSO之後测570nm的OD值最高都会有2左右
可是现在做法换成将 "sample浸泡在medium里24小时後当萃取液"
先在96孔盘中 每well seeding 6000颗 "培养24小时後换成萃取液"
时间点也是1.3.5.7.9天
可是当加入MTT反应完之後都没有蓝紫色结晶出现 DMSO加入後的颜色也很淡...
570nm测出来的OD值都0.2左右 跟之前比较实在差很多
想请问说 1.以96well的大小培养细胞 大概几天就会长满??
我实验的时间点是否过长?
2.另外我用双氧水来当作positive control 来杀细胞是否OK?
还是有其他更适合的药物??
请大家多多指教 感谢~~
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 203.71.94.5
1F：→ f9361046:第一个问题 因该要看是什麽细胞吧... 10/01 17:58
2F：→ f9361046:时间是否过长 因该看你实验目的为何吧 10/01 17:59
3F：推 a900535:有没有用显微镜观察细胞呢？ 10/01 22:48
4F：→ a900535:培养液换成萃取液的过程有没有做会让细胞大量流失掉的动作 10/01 22:49
5F：→ clock0706:细胞株是MG-63 平常10cm dish 大概3-4天继代 10/01 23:55
6F：→ clock0706:时间点做长是想看细胞从少到多 再来就是满了之後开始死 10/01 23:56
7F：→ clock0706:亡的曲线 10/01 23:56
8F：→ a001ou:24well只种5000太少了吧 96种6000到是太多了 10/02 00:47
9F：→ a001ou:若要培养长达9天还是改回24Well 5000细胞吧 10/02 00:48
10F：→ Tendin1015:我们都是用96在做MTT..有一点你要注意的是细胞数。 10/02 04:04
11F：→ Tendin1015:像我实验的细胞可以到50000颗，要先知道你用什麽细胞。 10/02 04:07
12F：推 birdddd:细胞数要看细胞株而决定 我们是细胞贴了之後就做处理耶 10/03 17:53