或許你可以搜尋我ID(小寫a + chiehdis) 看一下是不是類似的問題 如果是的話 相關回文可以看一下 那篇作者很厲害 幫助我很多~~ 另外 基於如何去除gDNA又保持RNA不被降解~提供給你一些我查到的方法： <<DNase>> 我們家本來用Ambion Turbo ~ 方法是加入 enzyme 和 buffer 後 37度 incubate 30分鐘 再加入inactivation reagent 4度五分鐘後離心取上清液 但RNA濃度和品質受到不小影響~(我想可能是高溫的關係) (但也很可能是我自己操作的失誤 因為有強者同方法依舊得到超好看的電泳和數據~) 改良方法 1.Fermentase 37度 10分鐘(縮短時間) 2.Roche 室溫(較低溫) 20分鐘(縮短時間) 缺點：但是以上兩者皆要過CI 步驟增加 回收量就會少~!! 3.Ambion 以resin當成inactivation reagent (避免化學或熱傷害RNA) http://www.ambion.com/techlib/tn/114/10.html 有原理和比較詳細的說明~ 缺點：聽說奇貴無比!!!! <<Kit>> 1.Qiagen 的 column 缺點： 較貴 且無法操作很大量~~(對我來說~因為我要的量很多!!!) <<直接在抽取過程中去除DNA>> 1.TRIzol v.s RNAzol 這是我打去詢問一個RNA乾燥產品時 sales提供我的~ (可以跟她拿個3ml的sample試用~) 和粉紅色的TRIzol不同 RNAzol是清澈的藍色液體 號稱是TRIzol系列第四代~~ 不用加CI 抽完RNA也不用去DNA 價錢是TRIzol的兩倍 但是依我用來抽取真菌的RNA看來 是沒有DNA汙染 但Nanodrop的值很差~ 濃度 純度 260/230(我用來看多醣汙染) 都比TRIzol低 所以就被我丟到一邊了....... (聽說抽取另一種真菌和植物的quality也都不好...) 缺點：貴 效果又不佳 最後結果 後來去找了TRIzol的protocol來看 發現其實它本來就可以去除DNA了!!! 我有跑過非變性電泳~(抱歉手邊沒圖 有空之後補!!) 大於1kb的地方都很乾淨~~ 其實TRIzol可以用來抽DNA DNA在分層的地方應該會被分到有機層 所以在分層提取的時候 如同之前文章版友的建議 盡量不要吸取到蛋白層的部分 犧牲多一點!!!!! 就可以避免掉DNA的污染了!!! 以上是我的經驗 如有錯誤 請多指教及海涵~ 也期望其他版友能提供建議!! 希望有幫助到你 一起加油吧:) ※ 引述《cqw80000 (草履蟲)》之銘言： : 目前的狀況是這樣的,我們實驗室是用TRIzol抽取RNA. : 抽取的過程中也很順利,RNA跑完電泳後發現有genomic DNA殘留. : 但是因為要把RNA反轉錄成cDNA,所以目前是先取出要反轉錄的RNA的量出來. : 取出來後打算加入DNase I於37度C作用30分鐘後,再於65度C作用5分鐘使DNase I失活. : 我的問題就是在去除genomic DNA的過程中,不知道會不會使RNA降解? : 假如RNA會降解的話,請問前輩還有什麼方式可以去除已經萃取好的RNA中的genomic DNA. : 感謝! -- * * * * * * ~呀唷~!!你要帶我出去玩嘛??~ * * \○/* * * * ( □ ) * * * * <\ * --

※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 220.136.182.103 ※ 編輯: chiehdis 來自: 220.136.182.103 (09/30 03:28) ※ 編輯: chiehdis 來自: 220.136.182.103 (09/30 03:28)