或许你可以搜寻我ID(小写a + chiehdis) 看一下是不是类似的问题 如果是的话 相关回文可以看一下 那篇作者很厉害 帮助我很多~~ 另外 基於如何去除gDNA又保持RNA不被降解~提供给你一些我查到的方法： <<DNase>> 我们家本来用Ambion Turbo ~ 方法是加入 enzyme 和 buffer 後 37度 incubate 30分钟 再加入inactivation reagent 4度五分钟後离心取上清液 但RNA浓度和品质受到不小影响~(我想可能是高温的关系) (但也很可能是我自己操作的失误 因为有强者同方法依旧得到超好看的电泳和数据~) 改良方法 1.Fermentase 37度 10分钟(缩短时间) 2.Roche 室温(较低温) 20分钟(缩短时间) 缺点：但是以上两者皆要过CI 步骤增加 回收量就会少~!! 3.Ambion 以resin当成inactivation reagent (避免化学或热伤害RNA) http://www.ambion.com/techlib/tn/114/10.html 有原理和比较详细的说明~ 缺点：听说奇贵无比!!!! <<Kit>> 1.Qiagen 的 column 缺点： 较贵 且无法操作很大量~~(对我来说~因为我要的量很多!!!) <<直接在抽取过程中去除DNA>> 1.TRIzol v.s RNAzol 这是我打去询问一个RNA乾燥产品时 sales提供我的~ (可以跟她拿个3ml的sample试用~) 和粉红色的TRIzol不同 RNAzol是清澈的蓝色液体 号称是TRIzol系列第四代~~ 不用加CI 抽完RNA也不用去DNA 价钱是TRIzol的两倍 但是依我用来抽取真菌的RNA看来 是没有DNA污染 但Nanodrop的值很差~ 浓度 纯度 260/230(我用来看多醣污染) 都比TRIzol低 所以就被我丢到一边了....... (听说抽取另一种真菌和植物的quality也都不好...) 缺点：贵 效果又不佳 最後结果 後来去找了TRIzol的protocol来看 发现其实它本来就可以去除DNA了!!! 我有跑过非变性电泳~(抱歉手边没图 有空之後补!!) 大於1kb的地方都很乾净~~ 其实TRIzol可以用来抽DNA DNA在分层的地方应该会被分到有机层 所以在分层提取的时候 如同之前文章版友的建议 尽量不要吸取到蛋白层的部分 牺牲多一点!!!!! 就可以避免掉DNA的污染了!!! 以上是我的经验 如有错误 请多指教及海涵~ 也期望其他版友能提供建议!! 希望有帮助到你 一起加油吧:) ※ 引述《cqw80000 (草履虫)》之铭言： : 目前的状况是这样的,我们实验室是用TRIzol抽取RNA. : 抽取的过程中也很顺利,RNA跑完电泳後发现有genomic DNA残留. : 但是因为要把RNA反转录成cDNA,所以目前是先取出要反转录的RNA的量出来. : 取出来後打算加入DNase I於37度C作用30分钟後,再於65度C作用5分钟使DNase I失活. : 我的问题就是在去除genomic DNA的过程中,不知道会不会使RNA降解? : 假如RNA会降解的话,请问前辈还有什麽方式可以去除已经萃取好的RNA中的genomic DNA. : 感谢! -- * * * * * * ~呀唷~!!你要带我出去玩嘛??~ * * \○/* * * * ( □ ) * * * * <\ * --

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