作者nprotei (NEil)
看板Biotech
標題[求救] MDCK 培養
時間Wed Sep 28 02:50:18 2011
想請問，各位有養 MDCK 經驗的朋友
如果要把長滿的細胞「全部」收起來數
trypsin的量，和反應時間(加medium recover之前) 大概怎麼估
我們之前實驗室 routine 在做
75T 是加 4mL 讓它反應 30mins，後加 6mL medium 之後數
(很抱歉 trypsin 濃度我我沒有很確定)
當然我們的定不是標準做法。
現在因為實驗需要，要在 25T 和 6 well plate 中養MDCK並計數
請問這樣 trypsin 和反應時間要怎麼修正最好
謝謝！
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.211.12
1F：推 a900535:我只有切過10 cm的，不知道能否幫上你的忙 09/28 18:59
2F：→ a900535:如果是10 cm以1:2分盤隔天會滿的比例，我trypsin下2ml 09/28 19:00
3F：→ a900535:10min左右就能全切下來，保險一點大約15min 09/28 19:01
4F：→ a900535:1:4後天滿的比例，切的時間延長到15，20min會全切下來 09/28 19:02
5F：→ a900535:1:6則要30min，通常無法完全切下來... 09/28 19:02
6F：→ a900535:TE濃度是10X(0.5%)的trypsin-EDTA 1ml加在10ml 1X PBS中 09/28 19:05
7F：→ a900535:計數一樣是取6ml打勻後，取10ul和mem,trypon blue做稀釋 09/28 19:07
8F：→ a900535:我通常是做四到八倍稀釋，沒有做過（全部計數） 09/28 19:08
9F：推 tinaminikimo:10X(0.5%)的trypsin-EDTA 1ml加在9ml 1X PBS中 15min 01/10 01:32
10F：推 artless9999:請問一下RNA Later如何使用於肝組織?使用效果如何? 02/06 23:49