作者nprotei (NEil)
看板Biotech
标题[求救] MDCK 培养
时间Wed Sep 28 02:50:18 2011
想请问，各位有养 MDCK 经验的朋友
如果要把长满的细胞「全部」收起来数
trypsin的量，和反应时间(加medium recover之前) 大概怎麽估
我们之前实验室 routine 在做
75T 是加 4mL 让它反应 30mins，後加 6mL medium 之後数
(很抱歉 trypsin 浓度我我没有很确定)
当然我们的定不是标准做法。
现在因为实验需要，要在 25T 和 6 well plate 中养MDCK并计数
请问这样 trypsin 和反应时间要怎麽修正最好
谢谢！
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.211.12
1F：推 a900535:我只有切过10 cm的，不知道能否帮上你的忙 09/28 18:59
2F：→ a900535:如果是10 cm以1:2分盘隔天会满的比例，我trypsin下2ml 09/28 19:00
3F：→ a900535:10min左右就能全切下来，保险一点大约15min 09/28 19:01
4F：→ a900535:1:4後天满的比例，切的时间延长到15，20min会全切下来 09/28 19:02
5F：→ a900535:1:6则要30min，通常无法完全切下来... 09/28 19:02
6F：→ a900535:TE浓度是10X(0.5%)的trypsin-EDTA 1ml加在10ml 1X PBS中 09/28 19:05
7F：→ a900535:计数一样是取6ml打匀後，取10ul和mem,trypon blue做稀释 09/28 19:07
8F：→ a900535:我通常是做四到八倍稀释，没有做过（全部计数） 09/28 19:08
9F：推 tinaminikimo:10X(0.5%)的trypsin-EDTA 1ml加在9ml 1X PBS中 15min 01/10 01:32
10F：推 artless9999:请问一下RNA Later如何使用於肝组织?使用效果如何? 02/06 23:49