作者soul777 (soul777)
看板Biotech
標題[方法] 增加PCR產物濃度
時間Sat Sep 17 19:34:59 2011
最近做抽組織RNA在轉CDNA作PCR
不過PCR的結果band都很淡不足以分析
不知各位有沒有遇過類似的狀況
目前想到解決的方法是
1.改變抽取RNA方式提高RNA的品質
2.改變RT的條件
3.改變PCR cycle數?
(以上只是方向還沒想到方法)
目前試過把CDNA濃縮再去PCR 不過結果並沒有改善
請各位我多點意見
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 163.14.203.184
1F：→ huuban:有可能本來表現量就少..你是要Elute PCR product的嗎？ 09/17 20:02
2F：→ soul777:嗯 已經該組織表現亮就較少 但要如何提高band亮度呢 09/17 20:13
3F：→ huuban:band很淡的原因有很多種啦..要看你目前操作方式才能改進 09/17 20:13
4F：→ huuban:是有要做cloning嗎？還是只要看到band就好呢？ 09/17 20:14
5F：→ soul777:目前只要提高band亮度就好 09/17 20:15
6F：→ Ianthegood:有也可能是這個product不管怎麼做最多就是這麼亮... 09/17 20:30
7F：推 icome:增加cycle 09/17 21:24
8F：→ goldfish0909:從原本的PCR吸一點出來再跑一次PCR~~ 09/17 21:58
9F：推 bwpoppo:樓上這招沒試過 09/18 10:38
10F：→ goldfish0909:我試過可行，或許原po可試試看~~ 09/18 14:56
11F：推 sunnyforever:1.annealing時間拉長一點 2. 原本的pcr取一點再pcr 09/18 22:46
12F：推 shenhsu:金魚大那招可行 不過就只有cloning或定序等要提高量才能用 09/19 00:17
13F：→ nike77114:用金魚大的方式,base錯誤率會不會有跟著上升的問題? 09/19 12:46
14F：→ kingtiger:PCR cycle數太高會有雜訊,RT用的RNA量多一點試試 09/20 11:57