作者soul777 (soul777)
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标题[方法] 增加PCR产物浓度
时间Sat Sep 17 19:34:59 2011
最近做抽组织RNA在转CDNA作PCR
不过PCR的结果band都很淡不足以分析
不知各位有没有遇过类似的状况
目前想到解决的方法是
1.改变抽取RNA方式提高RNA的品质
2.改变RT的条件
3.改变PCR cycle数?
(以上只是方向还没想到方法)
目前试过把CDNA浓缩再去PCR 不过结果并没有改善
请各位我多点意见
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 163.14.203.184
1F：→ huuban:有可能本来表现量就少..你是要Elute PCR product的吗？ 09/17 20:02
2F：→ soul777:嗯 已经该组织表现亮就较少 但要如何提高band亮度呢 09/17 20:13
3F：→ huuban:band很淡的原因有很多种啦..要看你目前操作方式才能改进 09/17 20:13
4F：→ huuban:是有要做cloning吗？还是只要看到band就好呢？ 09/17 20:14
5F：→ soul777:目前只要提高band亮度就好 09/17 20:15
6F：→ Ianthegood:有也可能是这个product不管怎麽做最多就是这麽亮... 09/17 20:30
7F：推 icome:增加cycle 09/17 21:24
8F：→ goldfish0909:从原本的PCR吸一点出来再跑一次PCR~~ 09/17 21:58
9F：推 bwpoppo:楼上这招没试过 09/18 10:38
10F：→ goldfish0909:我试过可行，或许原po可试试看~~ 09/18 14:56
11F：推 sunnyforever:1.annealing时间拉长一点 2. 原本的pcr取一点再pcr 09/18 22:46
12F：推 shenhsu:金鱼大那招可行 不过就只有cloning或定序等要提高量才能用 09/19 00:17
13F：→ nike77114:用金鱼大的方式,base错误率会不会有跟着上升的问题? 09/19 12:46
14F：→ kingtiger:PCR cycle数太高会有杂讯,RT用的RNA量多一点试试 09/20 11:57