作者tank415 ( )
看板Biotech
標題[討論] Koazk sequence
時間Thu Sep 15 16:48:19 2011
各位先進大家好
最近在做蛋白的deletion mutant
因次想要把不同的片段大小的蛋白clone出來
我想要問的是 不同片段大小的蛋白要表現的時候
需要在這些蛋白的前端加上 Kozak sequence嗎??
我所要用的plasmid是pCMV-tag 4這個plasmid
這個plasmid 是有一個CMV promoter但其MCS中並無 ATG site
所以我在clone的時候需要幫這些不同的片段加上Kozak sequence嗎??
謝謝!!
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◆ From: 140.116.1.134
1F：推 HEK293:MCS中怎麼會特地做ATG？Kozak只是相對，並不絕對需要其實。 09/15 17:14
我是在pCMV tag3中看到在Myc tag前面是有一個Kozak sequence
而tag3和tag4的差異是在於tag所接的位置
tag4是接在蛋白的後端 而CMV promoter的後方馬上就是MCS region
沒有這個序列不會引想到蛋白質的表達嗎?? 若是沒有這個序列
CMV promoter之後他如何得知那一段序列是我要的
這樣就會導致我的reading frame shift了吧!! 所以我想說是否要給他這個序列
還是說只要在我的蛋白的前方給他個ATG即可!!
※ 編輯: tank415 來自: 140.116.1.134 (09/15 17:24)
2F：推 bider:我覺得比較需要注意的是要記得去掉stop codon 如果想要tag 09/15 18:04
3F：→ bider:kozak裡有含ATG 如果deletion少掉ATG就要補 09/15 18:05
4F：推 HEK293:所以你的蛋白前面沒有start codon？況且這是fusion阿 09/15 18:06
沒錯 我要做的蛋白裡面是沒有start codon的!!
所以我才會想要加 Kozak sequence!!
※ 編輯: tank415 來自: 58.114.142.76 (09/15 23:33)