作者tank415 ( )
看板Biotech
标题[讨论] Koazk sequence
时间Thu Sep 15 16:48:19 2011
各位先进大家好
最近在做蛋白的deletion mutant
因次想要把不同的片段大小的蛋白clone出来
我想要问的是 不同片段大小的蛋白要表现的时候
需要在这些蛋白的前端加上 Kozak sequence吗??
我所要用的plasmid是pCMV-tag 4这个plasmid
这个plasmid 是有一个CMV promoter但其MCS中并无 ATG site
所以我在clone的时候需要帮这些不同的片段加上Kozak sequence吗??
谢谢!!
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.116.1.134
1F：推 HEK293:MCS中怎麽会特地做ATG？Kozak只是相对，并不绝对需要其实。 09/15 17:14
我是在pCMV tag3中看到在Myc tag前面是有一个Kozak sequence
而tag3和tag4的差异是在於tag所接的位置
tag4是接在蛋白的後端 而CMV promoter的後方马上就是MCS region
没有这个序列不会引想到蛋白质的表达吗?? 若是没有这个序列
CMV promoter之後他如何得知那一段序列是我要的
这样就会导致我的reading frame shift了吧!! 所以我想说是否要给他这个序列
还是说只要在我的蛋白的前方给他个ATG即可!!
※ 编辑: tank415 来自: 140.116.1.134 (09/15 17:24)
2F：推 bider:我觉得比较需要注意的是要记得去掉stop codon 如果想要tag 09/15 18:04
3F：→ bider:kozak里有含ATG 如果deletion少掉ATG就要补 09/15 18:05
4F：推 HEK293:所以你的蛋白前面没有start codon？况且这是fusion阿 09/15 18:06
没错 我要做的蛋白里面是没有start codon的!!
所以我才会想要加 Kozak sequence!!
※ 编辑: tank415 来自: 58.114.142.76 (09/15 23:33)