我也遇到跟原PO一樣的情況耶 況且我的採血量是比較少的 才20CC FICOLL分離出來還蠻OK的 可是在WASH的時候 PBMC不會離到最底層 會變層條狀或是片狀黏在管壁上 在回溶時常常打不散出現結團的情形 觀察那一團一團的也不像細胞 跟原PO看到的有點像 之前以為是PBS的問題 但改用RPMI仍同樣情況 現在再懷疑是抽血前有進食關係?? 已經不知道哪邊有問題了..... 我簡單附上POTOCOL 請大家幫我找找 謝謝 1.用紫頭管採血 2.全血比Ficoll為 2:1 (8ml:4ml) 緩慢加入 3.2350rpm 30mins 室溫 4.取白色細胞層與上層血漿 5.再離心1000rpm 10mins 6.倒掉 並用10ml RPMI wash 7.再離心1000rpm 10mins後算細胞培養 問題會在第5步驟時跑出來 離心後呈片狀並無法打散會有結團情形 ※ 引述《kappaher (惡靈退散)》之銘言： : 我是用Ficoll-paque分離lymphocyte : 只是分離的全血量很大(一次分離120ml) : 取全血時有注意採血管內的血液沒有凝結的血塊 : 全血會先用添加heparin的PBS做稀釋 : 然後進行分層~ : 而後取出霧狀層以3倍體積的PBS/heparin清洗1次 : 離心後去上清液 : 之後用RPMI清洗pellet2次 : 而團塊就在換至RPMI清洗的狀態下產生的 : 團塊的樣子是黃色 有點像是脂肪組織的感覺 大小最大約0.5公分 : 用pipetteman沖散 會變小塊，但沒辦法完全打散 : 在顯微鏡下觀察 結塊的東西並不是細胞 : 樣子有點像沒有菌絲的黴菌 : 而細胞會被它包住 或者細胞會圍在團塊的外面~ : 有點困擾.. 因為數量還滿多 (怕會影響細胞計數、濃度) : 不曉得有什麼方法可以改善? : 不知道有做過PBMC分離的各位 是否也有遇到這樣的狀況 : 或是怎麼解決掉團塊出現的問題?? : 或是有可能是什麼問題所產生的? --

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