我也遇到跟原PO一样的情况耶 况且我的采血量是比较少的 才20CC FICOLL分离出来还蛮OK的 可是在WASH的时候 PBMC不会离到最底层 会变层条状或是片状黏在管壁上 在回溶时常常打不散出现结团的情形 观察那一团一团的也不像细胞 跟原PO看到的有点像 之前以为是PBS的问题 但改用RPMI仍同样情况 现在再怀疑是抽血前有进食关系?? 已经不知道哪边有问题了..... 我简单附上POTOCOL 请大家帮我找找 谢谢 1.用紫头管采血 2.全血比Ficoll为 2:1 (8ml:4ml) 缓慢加入 3.2350rpm 30mins 室温 4.取白色细胞层与上层血浆 5.再离心1000rpm 10mins 6.倒掉 并用10ml RPMI wash 7.再离心1000rpm 10mins後算细胞培养 问题会在第5步骤时跑出来 离心後呈片状并无法打散会有结团情形 ※ 引述《kappaher (恶灵退散)》之铭言： : 我是用Ficoll-paque分离lymphocyte : 只是分离的全血量很大(一次分离120ml) : 取全血时有注意采血管内的血液没有凝结的血块 : 全血会先用添加heparin的PBS做稀释 : 然後进行分层~ : 而後取出雾状层以3倍体积的PBS/heparin清洗1次 : 离心後去上清液 : 之後用RPMI清洗pellet2次 : 而团块就在换至RPMI清洗的状态下产生的 : 团块的样子是黄色 有点像是脂肪组织的感觉 大小最大约0.5公分 : 用pipetteman冲散 会变小块，但没办法完全打散 : 在显微镜下观察 结块的东西并不是细胞 : 样子有点像没有菌丝的霉菌 : 而细胞会被它包住 或者细胞会围在团块的外面~ : 有点困扰.. 因为数量还满多 (怕会影响细胞计数、浓度) : 不晓得有什麽方法可以改善? : 不知道有做过PBMC分离的各位 是否也有遇到这样的状况 : 或是怎麽解决掉团块出现的问题?? : 或是有可能是什麽问题所产生的? --

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