作者wenwentien (期待雨後的彩虹)
看板Biotech
標題[求救] 細胞一直無法打散~
時間Sun Sep 11 13:50:30 2011
板上的專家你們好~
我最近在養BHK cells發生一些問題,細胞解凍時我用了非常高的密度
(不怕你們笑,我解凍兩管1.5ml的細胞到一個25T, 補medium到5ml)
隔天換medium, 接著就開始routine的換medium與繼代~
一開始應是trypsin的問題, trypsin處理,37度,15分鐘,有些細胞還牢牢的貼在plate上.
後來trypsin重配, 大概處理37度,5分鐘後, 細胞大部分都掉下來了, 但都是一片一片的,
我發現細胞一直打不散,不論是先小體積去打,混和後再繼續打, 還是增加打細胞次數,
還是無法打散這些細胞~
這導致細胞數量不均勻,我後續要做BHK細胞的生長曲線也是困難重重~
我本想trypsin處理再久一點, 但不知會不會對細胞造成傷害?
可否請版上專家給我一些建議?
謝謝你們~
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 114.40.14.20
1F：→ sancra:trypsin濃度? 有無加EDTA?? 09/11 15:10
2F：→ wenwentien:trypsin是0.25%, 我有加EDTA~ 09/11 21:13
3F：推 dixon7110147:我是用 trypsin-EDTA 0.5% 37度 5min 09/12 21:43
4F：→ wenwentien:謝謝提供~ 09/12 21:47
5F：推 zoom8080:可以試試用巴斯德管打幾次後再加medium中和trypsin 09/16 12:16