作者wenwentien (期待雨後的彩虹)
看板Biotech
标题[求救] 细胞一直无法打散~
时间Sun Sep 11 13:50:30 2011
板上的专家你们好~
我最近在养BHK cells发生一些问题,细胞解冻时我用了非常高的密度
(不怕你们笑,我解冻两管1.5ml的细胞到一个25T, 补medium到5ml)
隔天换medium, 接着就开始routine的换medium与继代~
一开始应是trypsin的问题, trypsin处理,37度,15分钟,有些细胞还牢牢的贴在plate上.
後来trypsin重配, 大概处理37度,5分钟後, 细胞大部分都掉下来了, 但都是一片一片的,
我发现细胞一直打不散,不论是先小体积去打,混和後再继续打, 还是增加打细胞次数,
还是无法打散这些细胞~
这导致细胞数量不均匀,我後续要做BHK细胞的生长曲线也是困难重重~
我本想trypsin处理再久一点, 但不知会不会对细胞造成伤害?
可否请版上专家给我一些建议?
谢谢你们~
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 114.40.14.20
1F：→ sancra:trypsin浓度? 有无加EDTA?? 09/11 15:10
2F：→ wenwentien:trypsin是0.25%, 我有加EDTA~ 09/11 21:13
3F：推 dixon7110147:我是用 trypsin-EDTA 0.5% 37度 5min 09/12 21:43
4F：→ wenwentien:谢谢提供~ 09/12 21:47
5F：推 zoom8080:可以试试用巴斯德管打几次後再加medium中和trypsin 09/16 12:16