作者someone666 (心不透澈不會懂多難得)
看板Biotech
標題[求救] ELISA二抗跟著一抗跑?!
時間Wed Sep 7 14:33:36 2011
有個問題想請問大家
最近在嘗試做ELISA的抗原盤
在測試時 發現沒有coating抗原的排數
結果竟然跟有coating抗原的差不多
都是跟著一抗血清的稀釋倍數在跑
就是血清稀釋倍數越低的 O.D值就越高
這是怎麼回事?? 明明沒有加抗源耶
一抗是用豬血清(10-70倍稀釋) 二抗是山羊抗豬+HRP(30000倍稀釋)
我都是用1%PBST來清洗五次 是洗不乾淨嗎??
想請問還有什麼其他可能的原因??
感謝大家!!!
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 211.75.203.167
1F：→ goshr:沒有blocking 09/07 18:00
2F：→ someone666:抱歉 忘了打~blocking用0.5% skim milk 09/07 22:47
3F：→ Locutus:一般不是用BSA blocking嗎 至少我們實驗室是這樣 09/08 00:08
4F：推 mattmatt:blocking方法很多, milk, BSA, gelatin都是常用的 09/09 03:34
5F：→ mattmatt:簡單一點就試試不同的blocking reagent 拉長blocking時間 09/09 03:36
6F：→ mattmatt:增加二抗稀釋倍數,縮短二抗反應時間,wash次數&強度增加等 09/09 03:37
7F：推 mattmatt:麻煩就是換抗體或是換盤子了 有可能你的抗體去跟誰反應了 09/09 03:40
8F：→ someone666:感謝感謝!! 現在正在嘗試安佳脫脂奶粉 哈~ 09/09 09:13