作者someone666 (心不透澈不会懂多难得)
看板Biotech
标题[求救] ELISA二抗跟着一抗跑?!
时间Wed Sep 7 14:33:36 2011
有个问题想请问大家
最近在尝试做ELISA的抗原盘
在测试时 发现没有coating抗原的排数
结果竟然跟有coating抗原的差不多
都是跟着一抗血清的稀释倍数在跑
就是血清稀释倍数越低的 O.D值就越高
这是怎麽回事?? 明明没有加抗源耶
一抗是用猪血清(10-70倍稀释) 二抗是山羊抗猪+HRP(30000倍稀释)
我都是用1%PBST来清洗五次 是洗不乾净吗??
想请问还有什麽其他可能的原因??
感谢大家!!!
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 211.75.203.167
1F：→ goshr:没有blocking 09/07 18:00
2F：→ someone666:抱歉 忘了打~blocking用0.5% skim milk 09/07 22:47
3F：→ Locutus:一般不是用BSA blocking吗 至少我们实验室是这样 09/08 00:08
4F：推 mattmatt:blocking方法很多, milk, BSA, gelatin都是常用的 09/09 03:34
5F：→ mattmatt:简单一点就试试不同的blocking reagent 拉长blocking时间 09/09 03:36
6F：→ mattmatt:增加二抗稀释倍数,缩短二抗反应时间,wash次数&强度增加等 09/09 03:37
7F：推 mattmatt:麻烦就是换抗体或是换盘子了 有可能你的抗体去跟谁反应了 09/09 03:40
8F：→ someone666:感谢感谢!! 现在正在尝试安佳脱脂奶粉 哈~ 09/09 09:13