作者smashingstar (howard)
看板Biotech
標題[求救] 養BL21的問題?
時間Fri Sep 2 11:04:26 2011
各位大大
小弟是跨領域的學生
從來沒有養過e.coli @@
在養菌上遇到一些問題
以下是我目前養菌的方法 不知道是否正確
請各位幫我看一下 是否邊有問題需要修正
5ml LB + 1ml BL21(有Amp抗性) + 6ul Amp(1ul/ml)
放在37度培養 overnight(14-16小時?)
加入6ml 100% glycerol(最終為50%)
分裝到eppendorft 放於負80度保存
關於overnigt有爬文到說不能培養太久
不然Amp會沒用?
所以14-16小時OK嗎?
如果要爆量的話可以培養多久再分管保存?
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.120.131.166
1F：→ yawai:可以濃縮之後保存阿~ 養好的菌液6000rpm離心 09/02 13:01
2F：→ yawai:再看你要回溶多少 最後再加glycerol凍菌 09/02 13:02
3F：推 hangzer:基本上凍菌不需要那麼多 凍個1ml起來就很夠了 09/02 13:33
4F：→ blence:5mlLB+1mlBL21,如果BL21有濁度,2小時就爆了,不用overnight 09/02 13:51
5F：→ even2300471:amp濃度這麼低? 才0.1ug/ml 我至少用100ug/ml 09/02 15:57
6F：推 dodomilk:原文Amp的濃度我看不懂...總之Amp的最終濃度要100ug/ml 09/02 18:53
7F：→ dodomilk:還有，你的1ml BL21是從哪裡來的？ OD600多少？ 09/02 18:54
8F：推 Realthugz:amp 濃度多少? 一般做法是LB配大瓶+amp放4度 要養再取 09/02 21:18
9F：→ Realthugz:Amp一般50ug/ml即可 有些人會用100ug/ml 09/02 21:19
10F：→ Realthugz:養出來後plasmid要check一下再凍 萬一不是就是做白工 09/02 21:20
11F：→ Realthugz:從你1ul/ml的加法 我推估你的stock應該是50-100mg/ml 09/02 21:22
12F：推 icome:細菌這種東西... 沾一滴就夠了 還有養太滿細菌會死掉 09/03 22:26
13F：→ icome:5ml沾一滴菌液 隔夜就會全滿 加1ml太暴力@@ 09/03 22:30
14F：推 tio2catalyst:你的稀釋菌液太濃了，帶Amp的菌會被競爭掉 09/04 00:03
15F：推 tio2catalyst:建議你可以做50X稀釋，搖12hr，Amp濃一點(1~200ug/ml 09/04 00:06
16F：→ smashingstar:謝謝各位的意見 我來try 看看@@ 09/05 10:20
17F：→ smashingstar:我剛剛去check了我用的amp濃度，實驗室配好的是 09/05 14:08
18F：→ smashingstar:所以只用1ul的amp 濃度就有100ug/ml了 09/05 14:10
19F：→ smashingstar:配好的amp濃度100mg/ml 09/05 14:11
20F：→ smashingstar:想問Y大 回溶pellet一樣是用LB去溶 離心溫度是室溫? 09/05 14:36