作者smashingstar (howard)
看板Biotech
标题[求救] 养BL21的问题?
时间Fri Sep 2 11:04:26 2011
各位大大
小弟是跨领域的学生
从来没有养过e.coli @@
在养菌上遇到一些问题
以下是我目前养菌的方法 不知道是否正确
请各位帮我看一下 是否边有问题需要修正
5ml LB + 1ml BL21(有Amp抗性) + 6ul Amp(1ul/ml)
放在37度培养 overnight(14-16小时?)
加入6ml 100% glycerol(最终为50%)
分装到eppendorft 放於负80度保存
关於overnigt有爬文到说不能培养太久
不然Amp会没用?
所以14-16小时OK吗?
如果要爆量的话可以培养多久再分管保存?
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.120.131.166
1F：→ yawai:可以浓缩之後保存阿~ 养好的菌液6000rpm离心 09/02 13:01
2F：→ yawai:再看你要回溶多少 最後再加glycerol冻菌 09/02 13:02
3F：推 hangzer:基本上冻菌不需要那麽多 冻个1ml起来就很够了 09/02 13:33
4F：→ blence:5mlLB+1mlBL21,如果BL21有浊度,2小时就爆了,不用overnight 09/02 13:51
5F：→ even2300471:amp浓度这麽低? 才0.1ug/ml 我至少用100ug/ml 09/02 15:57
6F：推 dodomilk:原文Amp的浓度我看不懂...总之Amp的最终浓度要100ug/ml 09/02 18:53
7F：→ dodomilk:还有，你的1ml BL21是从哪里来的？ OD600多少？ 09/02 18:54
8F：推 Realthugz:amp 浓度多少? 一般做法是LB配大瓶+amp放4度 要养再取 09/02 21:18
9F：→ Realthugz:Amp一般50ug/ml即可 有些人会用100ug/ml 09/02 21:19
10F：→ Realthugz:养出来後plasmid要check一下再冻 万一不是就是做白工 09/02 21:20
11F：→ Realthugz:从你1ul/ml的加法 我推估你的stock应该是50-100mg/ml 09/02 21:22
12F：推 icome:细菌这种东西... 沾一滴就够了 还有养太满细菌会死掉 09/03 22:26
13F：→ icome:5ml沾一滴菌液 隔夜就会全满 加1ml太暴力@@ 09/03 22:30
14F：推 tio2catalyst:你的稀释菌液太浓了，带Amp的菌会被竞争掉 09/04 00:03
15F：推 tio2catalyst:建议你可以做50X稀释，摇12hr，Amp浓一点(1~200ug/ml 09/04 00:06
16F：→ smashingstar:谢谢各位的意见 我来try 看看@@ 09/05 10:20
17F：→ smashingstar:我刚刚去check了我用的amp浓度，实验室配好的是 09/05 14:08
18F：→ smashingstar:所以只用1ul的amp 浓度就有100ug/ml了 09/05 14:10
19F：→ smashingstar:配好的amp浓度100mg/ml 09/05 14:11
20F：→ smashingstar:想问Y大 回溶pellet一样是用LB去溶 离心温度是室温? 09/05 14:36