作者carnation (卡內省)
看板Biotech
標題[求救] ELISA standard curve
時間Wed Aug 24 19:39:11 2011
我是買kit直接照protocal做，
做了三次，最高濃度的吸光值越做越低... 不知道為什麼
按照protoal的步驟是這樣:
coating capture ab overnight (第一次20hr，第二次17hr，
第三次15hr，不知道到底有沒有影響?)
→ PBST wash → assay buffer 1hr (應該就是blocking)
→ PBST wash → standard ab (從500pg/mL 到 3pg/mL) 2hr
→ PBST wash → detection ab 1hr
→ PBST wash → HRP 30min
→ PBST wash → + substrate solution 15min → + stop solution
全部只有PBST是自己配的，其他都是kit
光看我的最高濃度500pg/mL 吸光值從1.17 → 0.72 → 0.34
實在是慘不忍睹... 過程都一樣 不知道到底是哪裡有問題
唯一想到的只有一開始coating time 不一樣，可這真的會差這麼多嗎...
更不用提很小的那兩個濃度 3pg, 7pg (因為原廠付的COA有做到這麼低的濃度)
blank 的吸光值都比他們高... 扣掉之後變負的...
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◆ From: 118.169.74.154
※ 編輯: carnation 來自: 118.169.74.154 (08/24 19:40)
1F：推 yaliu:coating時間應該不會有很大差別～假設各管都按照說明書這樣 08/25 22:36
2F：→ yaliu:儲放～那麼會不會是你std可能來回解凍多次？不過我記得我用 08/25 22:37
3F：→ yaliu:的std也有解凍過3次，也沒問題說(但說明書說要拿新的一管) 08/25 22:38
4F：→ yaliu:還是你呈色時間要再延長看看? 08/25 22:40