作者carnation (卡内省)
看板Biotech
标题[求救] ELISA standard curve
时间Wed Aug 24 19:39:11 2011
我是买kit直接照protocal做，
做了三次，最高浓度的吸光值越做越低... 不知道为什麽
按照protoal的步骤是这样:
coating capture ab overnight (第一次20hr，第二次17hr，
第三次15hr，不知道到底有没有影响?)
→ PBST wash → assay buffer 1hr (应该就是blocking)
→ PBST wash → standard ab (从500pg/mL 到 3pg/mL) 2hr
→ PBST wash → detection ab 1hr
→ PBST wash → HRP 30min
→ PBST wash → + substrate solution 15min → + stop solution
全部只有PBST是自己配的，其他都是kit
光看我的最高浓度500pg/mL 吸光值从1.17 → 0.72 → 0.34
实在是惨不忍睹... 过程都一样 不知道到底是哪里有问题
唯一想到的只有一开始coating time 不一样，可这真的会差这麽多吗...
更不用提很小的那两个浓度 3pg, 7pg (因为原厂付的COA有做到这麽低的浓度)
blank 的吸光值都比他们高... 扣掉之後变负的...
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◆ From: 118.169.74.154
※ 编辑: carnation 来自: 118.169.74.154 (08/24 19:40)
1F：推 yaliu:coating时间应该不会有很大差别～假设各管都按照说明书这样 08/25 22:36
2F：→ yaliu:储放～那麽会不会是你std可能来回解冻多次？不过我记得我用 08/25 22:37
3F：→ yaliu:的std也有解冻过3次，也没问题说(但说明书说要拿新的一管) 08/25 22:38
4F：→ yaliu:还是你呈色时间要再延长看看? 08/25 22:40