作者chiehdis (chiehhime)
看板Biotech
標題[求救] 用TRIzol抽RNA時 想要去除DNA
時間Wed Aug 24 15:39:45 2011
爬文已有相同標題 但還是有些不清楚處想麻煩大家m(_ _)m
實驗(genomic sequencing)需要大量且較純的RNA.
目前我是以TRIzol抽取 質量都還OK~
問題出在最後需要用DNase去除DNA的37度30分鐘的incubation.
此步驟會讓RNA降解非常嚴重!!濃度直接掉了五.六倍~(nanodrop)
膠片也難看到一個極致!!(抱歉手邊無圖~)
想請問各位 有無去除DNA而不傷害RNA的方法??
爬文發現 似乎用TRIzol抽就可以把大部分DNA去除???
跑非變性膠會看到上面有一大坨gDNA嗎??
(抱歉我沒試過~我接收的prorocol都有DNase的步驟)
(等材料長好~我會試試看!!)
另外 聽說有不需要incubate的去除DNA方法???
(某種試劑加入幾滴即可??)
(正等待消息來源寄給我相關資訊)
還有一個約是TRIzol價錢兩倍的新產品 RNAzol (第四代??)
在實驗中可以不用加chlroform 也可以省掉DNase
(偷偷說現在有試用品可以拿~不過只有3ml的樣子Q口Q)
可是真的爆炸貴的!!!
該如何是好??
麻煩大家了!!
--
* * *
* * * ~呀唷~!!你要帶我出去玩嘛??~
* * \○/* *
* * ( □ ) * *
* * <\ *
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 123.193.189.37
1F：推 Realthugz:column kit? 08/24 15:48
2F：推 ray289:我們家是用Roche DNaseI, RT, 20 min RNA的品質非常OK~ 08/24 16:05
3F：→ shenhsu:記得要用RNase free 的DNase 08/24 20:06
4F：推 Rarelay:Qiagen 有 gDNA elimination column 08/24 23:34
5F：→ chiehdis:萬分感謝大家的意見 我會去查查這方面的資料!! 08/26 11:19
6F：推 lovenainai:trizol抽完後用 Lithium chloride 沉澱 RNA 08/26 12:36
7F：推 reinherd:我推薦qiagen RNeasy Kit 08/26 22:36
8F：→ chiehdis:給樓上L大 我有經過LiCl的步驟 但我是為了去除多醣~ 08/27 05:34
9F：→ chiehdis:謝謝大家 有提到的我都會找資料看看的~再次感謝!!!! 08/27 05:35
10F：推 zoom8080:加完氯仿分層後,吸取上層時犧牲一點不要去動到分層面 09/09 15:49