作者chiehdis (chiehhime)
看板Biotech
标题[求救] 用TRIzol抽RNA时 想要去除DNA
时间Wed Aug 24 15:39:45 2011
爬文已有相同标题 但还是有些不清楚处想麻烦大家m(_ _)m
实验(genomic sequencing)需要大量且较纯的RNA.
目前我是以TRIzol抽取 质量都还OK~
问题出在最後需要用DNase去除DNA的37度30分钟的incubation.
此步骤会让RNA降解非常严重!!浓度直接掉了五.六倍~(nanodrop)
胶片也难看到一个极致!!(抱歉手边无图~)
想请问各位 有无去除DNA而不伤害RNA的方法??
爬文发现 似乎用TRIzol抽就可以把大部分DNA去除???
跑非变性胶会看到上面有一大坨gDNA吗??
(抱歉我没试过~我接收的prorocol都有DNase的步骤)
(等材料长好~我会试试看!!)
另外 听说有不需要incubate的去除DNA方法???
(某种试剂加入几滴即可??)
(正等待消息来源寄给我相关资讯)
还有一个约是TRIzol价钱两倍的新产品 RNAzol (第四代??)
在实验中可以不用加chlroform 也可以省掉DNase
(偷偷说现在有试用品可以拿~不过只有3ml的样子Q口Q)
可是真的爆炸贵的!!!
该如何是好??
麻烦大家了!!
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* * * ~呀唷~!!你要带我出去玩嘛??~
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1F：推 Realthugz:column kit? 08/24 15:48
2F：推 ray289:我们家是用Roche DNaseI, RT, 20 min RNA的品质非常OK~ 08/24 16:05
3F：→ shenhsu:记得要用RNase free 的DNase 08/24 20:06
4F：推 Rarelay:Qiagen 有 gDNA elimination column 08/24 23:34
5F：→ chiehdis:万分感谢大家的意见 我会去查查这方面的资料!! 08/26 11:19
6F：推 lovenainai:trizol抽完後用 Lithium chloride 沉淀 RNA 08/26 12:36
7F：推 reinherd:我推荐qiagen RNeasy Kit 08/26 22:36
8F：→ chiehdis:给楼上L大 我有经过LiCl的步骤 但我是为了去除多醣~ 08/27 05:34
9F：→ chiehdis:谢谢大家 有提到的我都会找资料看看的~再次感谢!!!! 08/27 05:35
10F：推 zoom8080:加完氯仿分层後,吸取上层时牺牲一点不要去动到分层面 09/09 15:49