作者dendritic ()
看板Biotech
標題Re: [求救] MDCK cell泡在PBS中脫落
時間Mon Aug 15 23:33:01 2011
※ 引述《a900535 (靖陽)》之銘言：
: 這個問題困擾我蠻長一段時間了...我做plaque assay多於一盤時，就會一次只處理一盤
: （目前最多只有做到三盤）但時間掌握好像有點問題，細胞總是會掉下來
: 1.先將第一盤medium移除，以1x含Ca和Mg的PBS wash
: 2.搖晃後移除PBS，用顯微鏡觀察細胞有無掉落
: 3.沒掉落，再加PBS wash第二次
: 此時先讓細胞泡在PBS中，去處理第二盤（助教操作時曾讓細胞泡在PBS中，沒事）
: 4.將第二盤medium移除，以1x含Ca和Mg的PBS wash
: 5.搖晃後移除PBS，用顯微鏡觀察細胞有無掉落
: 6.沒掉落，再加PBS wash第二次
: 7.將第一盤的PBS移除，用顯微鏡觀察
: 此時，靠well 左側的細胞有的皺縮有的掉落了一大片（通常是12 well左邊兩排 ）
: 8.把藥物和病毒下到第一盤cell
: 9.將第二盤的PBS移除，用顯微鏡觀察
: 也發生了同樣的掉落情形
: 之前大概都是這樣，這次更嚴重，不只兩排掉，幾乎所有well都掉...不過這次因為
: 時間緣故，細胞數沒有之前滿我就下了，大概是85%滿||||
^^^^^這樣要怎麼數plaque呀?
: 應該要接近95~100%滿，但細胞還不到擠的程度下病毒
: 但老闆說PBS不可能造成這樣的狀況（還沒跟她說滿度問題）
: 而且就算會掉，我掉的方向也和她以前看過的不同邊@@"
: （我是左手略抬高12 well，讓PBS流到右側後吸乾，此時最左兩排細胞掉落的地方
: 不受PBS的覆蓋）
^^^^^^^^^^^^^ 我想應該是這時侯造成的
我之前用6 well plate做plaque assay也會有這種情形
而且都是過兩天染完色才發現.....
所以之後我在wash時 仍然會傾斜盤子 不過一次只吸well中一半的體積
(例如我用2mL PBS wash, 就先吸出1mL)
而且每吸一個well 就把盤子擺平 讓剛剛因為傾斜而沒有PBS覆蓋的細胞泡個一兩秒
當每個well都吸過一輪後 再重複一次 把剩下的PBS吸乾淨
從此細胞就不再出現脫落的情形
以上希望對你有幫助
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◆ From: 114.42.129.218
1F：推 a900535:85%滿的我後來還是硬著頭皮去染色了，plaque就很亂跳(當然 08/16 11:29
2F：→ a900535:雖然有細胞，但染色就很淡（這也當然|||）就結果來看等於 08/16 11:30
3F：→ a900535:白做了，不過就是檢討的新方向...（反省） 08/16 11:30
4F：→ a900535:真是非常感謝你！我今天剛好有要感染（乖乖等細胞滿） 08/16 11:31
5F：→ a900535:就來試試看^^ 08/16 11:31