作者dendritic ()
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标题Re: [求救] MDCK cell泡在PBS中脱落
时间Mon Aug 15 23:33:01 2011
※ 引述《a900535 (靖阳)》之铭言：
: 这个问题困扰我蛮长一段时间了...我做plaque assay多於一盘时，就会一次只处理一盘
: （目前最多只有做到三盘）但时间掌握好像有点问题，细胞总是会掉下来
: 1.先将第一盘medium移除，以1x含Ca和Mg的PBS wash
: 2.摇晃後移除PBS，用显微镜观察细胞有无掉落
: 3.没掉落，再加PBS wash第二次
: 此时先让细胞泡在PBS中，去处理第二盘（助教操作时曾让细胞泡在PBS中，没事）
: 4.将第二盘medium移除，以1x含Ca和Mg的PBS wash
: 5.摇晃後移除PBS，用显微镜观察细胞有无掉落
: 6.没掉落，再加PBS wash第二次
: 7.将第一盘的PBS移除，用显微镜观察
: 此时，靠well 左侧的细胞有的皱缩有的掉落了一大片（通常是12 well左边两排 ）
: 8.把药物和病毒下到第一盘cell
: 9.将第二盘的PBS移除，用显微镜观察
: 也发生了同样的掉落情形
: 之前大概都是这样，这次更严重，不只两排掉，几乎所有well都掉...不过这次因为
: 时间缘故，细胞数没有之前满我就下了，大概是85%满||||
^^^^^这样要怎麽数plaque呀?
: 应该要接近95~100%满，但细胞还不到挤的程度下病毒
: 但老板说PBS不可能造成这样的状况（还没跟她说满度问题）
: 而且就算会掉，我掉的方向也和她以前看过的不同边@@"
: （我是左手略抬高12 well，让PBS流到右侧後吸乾，此时最左两排细胞掉落的地方
: 不受PBS的覆盖）
^^^^^^^^^^^^^ 我想应该是这时侯造成的
我之前用6 well plate做plaque assay也会有这种情形
而且都是过两天染完色才发现.....
所以之後我在wash时 仍然会倾斜盘子 不过一次只吸well中一半的体积
(例如我用2mL PBS wash, 就先吸出1mL)
而且每吸一个well 就把盘子摆平 让刚刚因为倾斜而没有PBS覆盖的细胞泡个一两秒
当每个well都吸过一轮後 再重复一次 把剩下的PBS吸乾净
从此细胞就不再出现脱落的情形
以上希望对你有帮助
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 114.42.129.218
1F：推 a900535:85%满的我後来还是硬着头皮去染色了，plaque就很乱跳(当然 08/16 11:29
2F：→ a900535:虽然有细胞，但染色就很淡（这也当然|||）就结果来看等於 08/16 11:30
3F：→ a900535:白做了，不过就是检讨的新方向...（反省） 08/16 11:30
4F：→ a900535:真是非常感谢你！我今天刚好有要感染（乖乖等细胞满） 08/16 11:31
5F：→ a900535:就来试试看^^ 08/16 11:31