作者shgwan2010 (雪拉貝瑞)
看板Biotech
標題[求救] western 反白現象
時間Thu Aug 11 01:07:10 2011
我是使用NBT & BCIP的染色呈色方式
一抗濃度是1:1000(5ml稀釋液中加入5ul的抗體)
室溫處理兩小時
二抗是兔子血清同樣濃度
室溫處理45分鐘
放入呈色液中搖晃至出現預期產物
但是我的蛋白質產物都呈現反白的現象發生
因為Marker正常是以推測應該是一ˋ二抗的問題
麻煩大家幫我看看問題在哪邊
謝謝大家了
下面是我的Western圖片
http://imageshack.us/photo/my-images/691/tic55abtestdry.jpg/
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◆ From: 203.72.87.85
2F：推 boblu:反白就是反應太強 應調整（降低） 一 二 抗濃度 08/11 03:28
3F：推 liouoiu:一抗太強了 調整一下就會改善 08/11 11:38
4F：→ shgwan2010:那麼降低的量應該是要多少比較好呢?沒有辦法一直嘗試.. 08/11 12:07
5F：推 yaprint:PBST沒加tween20 08/11 12:09
6F：→ Realthugz:抗體不做titration嗎... 08/11 15:55
7F：→ shgwan2010:PBST是Wash時用的TBS buffer嗎?我有加1% tween20 08/11 16:41
8F：→ shgwan2010:titration??對不起我不太清楚您的意思... 08/11 16:42
9F：→ shgwan2010:我的稀釋液為1%BSA 0.05%tween20in TBS buffer 08/11 16:43
10F：→ shgwan2010:抗體單純就是血清和甘油1:1 08/11 16:44
11F：→ yaprint:有看過沒配好的TBS，因為滅菌後沒加TWEEN20跑出來很像這樣 08/11 21:10
12F：→ boblu:抗體濃度就是自己要踹 沒有別招吧 08/12 01:51