作者shgwan2010 (雪拉贝瑞)
看板Biotech
标题[求救] western 反白现象
时间Thu Aug 11 01:07:10 2011
我是使用NBT & BCIP的染色呈色方式
一抗浓度是1:1000(5ml稀释液中加入5ul的抗体)
室温处理两小时
二抗是兔子血清同样浓度
室温处理45分钟
放入呈色液中摇晃至出现预期产物
但是我的蛋白质产物都呈现反白的现象发生
因为Marker正常是以推测应该是一ˋ二抗的问题
麻烦大家帮我看看问题在哪边
谢谢大家了
下面是我的Western图片
http://imageshack.us/photo/my-images/691/tic55abtestdry.jpg/
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 203.72.87.85
2F：推 boblu:反白就是反应太强 应调整（降低） 一 二 抗浓度 08/11 03:28
3F：推 liouoiu:一抗太强了 调整一下就会改善 08/11 11:38
4F：→ shgwan2010:那麽降低的量应该是要多少比较好呢?没有办法一直尝试.. 08/11 12:07
5F：推 yaprint:PBST没加tween20 08/11 12:09
6F：→ Realthugz:抗体不做titration吗... 08/11 15:55
7F：→ shgwan2010:PBST是Wash时用的TBS buffer吗?我有加1% tween20 08/11 16:41
8F：→ shgwan2010:titration??对不起我不太清楚您的意思... 08/11 16:42
9F：→ shgwan2010:我的稀释液为1%BSA 0.05%tween20in TBS buffer 08/11 16:43
10F：→ shgwan2010:抗体单纯就是血清和甘油1:1 08/11 16:44
11F：→ yaprint:有看过没配好的TBS，因为灭菌後没加TWEEN20跑出来很像这样 08/11 21:10
12F：→ boblu:抗体浓度就是自己要踹 没有别招吧 08/12 01:51