作者kakaman (日子過的真快阿)
看板Biotech
標題[求救] 急問冷凍切片
時間Tue Aug 9 11:52:52 2011
想請問一下常常作冷凍切片的高手們
最近在作老鼠腦的切片
作完perfusion後,以4%PFA固定overnight
接著用30%蔗糖溶液脫水overnight
然後以刀片切取所要的部位作OCT包埋
包埋溫度為室溫30min,接著放到乾冰堆裡冷凍
隔天就切片,切片溫度-20到-12間
切的時後發現組織本身沒有皺摺
但是組織外有很多皺摺
導致貼片組織看起來有不少皺摺
想請問大家該怎麼改善這種問題
謝謝~~
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◆ From: 140.112.125.206
1F：→ young315:有點看不懂你的問題~不過你的溫度似乎偏高~我是用-25度 08/09 13:41
2F：推 warumireille:-20~-12 溫度 range 太大了吧, 差一度就可以 08/09 13:50
3F：→ warumireille:讓你天堂地獄勒... 08/09 13:51
4F：→ vandia:溫度太高過刀的時候片子會皺,應該是連sample的位置都皺了 08/09 16:19
5F：→ vandia:另外,如果切取組織很大塊,30minOCT會不會有點太短? 08/09 16:20
6F：推 jun1229:切Brain的溫度大概落在-20~-25之間應該都還好,我是用-23度 08/12 14:11
7F：→ jun1229:再來你放乾冰堆裡隔天乾冰有化掉嗎?乾冰的溫度不好控制 08/12 14:12
8F：→ jun1229:我用cryostat的話brain包埋完會丟到-20度冰箱O/N 08/12 14:15
9F：→ jun1229:另外你貼片的時候片子有沒有攤開?有時候切完片子會捲起來 08/12 14:16