作者kakaman (日子过的真快阿)
看板Biotech
标题[求救] 急问冷冻切片
时间Tue Aug 9 11:52:52 2011
想请问一下常常作冷冻切片的高手们
最近在作老鼠脑的切片
作完perfusion後,以4%PFA固定overnight
接着用30%蔗糖溶液脱水overnight
然後以刀片切取所要的部位作OCT包埋
包埋温度为室温30min,接着放到乾冰堆里冷冻
隔天就切片,切片温度-20到-12间
切的时後发现组织本身没有皱摺
但是组织外有很多皱摺
导致贴片组织看起来有不少皱摺
想请问大家该怎麽改善这种问题
谢谢~~
发问时请注意，若是要问实验相关的问题，请将实验的步骤、所用的条件大致列出
以方便板友帮您追踪问题
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◆ From: 140.112.125.206
1F：→ young315:有点看不懂你的问题~不过你的温度似乎偏高~我是用-25度 08/09 13:41
2F：推 warumireille:-20~-12 温度 range 太大了吧, 差一度就可以 08/09 13:50
3F：→ warumireille:让你天堂地狱勒... 08/09 13:51
4F：→ vandia:温度太高过刀的时候片子会皱,应该是连sample的位置都皱了 08/09 16:19
5F：→ vandia:另外,如果切取组织很大块,30minOCT会不会有点太短? 08/09 16:20
6F：推 jun1229:切Brain的温度大概落在-20~-25之间应该都还好,我是用-23度 08/12 14:11
7F：→ jun1229:再来你放乾冰堆里隔天乾冰有化掉吗?乾冰的温度不好控制 08/12 14:12
8F：→ jun1229:我用cryostat的话brain包埋完会丢到-20度冰箱O/N 08/12 14:15
9F：→ jun1229:另外你贴片的时候片子有没有摊开?有时候切完片子会卷起来 08/12 14:16