在版上爬文有爬到幾篇有關E. coli是否可以表現recombinant EGFP的討論 看來各位專家基本上都認為是可以，不過好像還沒有人分享實際經驗 所以在此提出我的實驗想請教大家一些問題 以我的實驗來說，我實驗的目的是要在一段protein A的C-ter.接上EGFP後treat cancer cell line來觀察cancer cells uptake的狀況，但我目前還在純化protein 的階段，之前已經construct出我要的recombinant protein A-EGFP fusion plasmid， 我知道如果要大量表現蛋白用E. coli BL21會比較好 但是現在我將這個recombinant plasmid送進E. coli DH5alpha後，想說先來試試看 在induction後是否會產生螢光，我的做法有兩種， 第一是將DH5alpha養在含有Ampicillin和IPTG的LB agar plate上養overnight後 用藍光或紫外光激發看是否會有綠色螢光產生 第二是將DH5alpha養在含有Ampicillin和IPTG的LB medium養overnight後 一樣用藍光或紫外光激發看是否會有綠色螢光產生 結果是看不太出來有綠色的螢光產生 但是我有用螢光顯微鏡將E. coli塗在載玻片上後觀察 用藍光激發後發現會有微弱的綠色螢光存在，但是真的很微弱， 要用暗視野曝光20秒才拍得到 後來我用sonicator將菌打破後收集上清液，理論上應該可以觀察到上清液 發出綠色螢光，因為會有native form的protein A-EGFP存在上清液中 結果是一樣看不出綠色螢光 這邊想請教大家是否有這方面的經驗可以分享，是否會因為我前面接一段protein A 而影響到EGFP的beta barrel結構導致無法正確folding產生螢光 不過在上課時老師有提到不管EGFP N-ter.或C-ter.接上什麼蛋白，基本上都會發光 還是用DH5alpha表現的蛋白有比較大的機率被protease分解， 所以EGFP表現的量不足以用肉眼觀察 以上，請教大家，謝謝了。 --

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