在版上爬文有爬到几篇有关E. coli是否可以表现recombinant EGFP的讨论 看来各位专家基本上都认为是可以，不过好像还没有人分享实际经验 所以在此提出我的实验想请教大家一些问题 以我的实验来说，我实验的目的是要在一段protein A的C-ter.接上EGFP後treat cancer cell line来观察cancer cells uptake的状况，但我目前还在纯化protein 的阶段，之前已经construct出我要的recombinant protein A-EGFP fusion plasmid， 我知道如果要大量表现蛋白用E. coli BL21会比较好 但是现在我将这个recombinant plasmid送进E. coli DH5alpha後，想说先来试试看 在induction後是否会产生萤光，我的做法有两种， 第一是将DH5alpha养在含有Ampicillin和IPTG的LB agar plate上养overnight後 用蓝光或紫外光激发看是否会有绿色萤光产生 第二是将DH5alpha养在含有Ampicillin和IPTG的LB medium养overnight後 一样用蓝光或紫外光激发看是否会有绿色萤光产生 结果是看不太出来有绿色的萤光产生 但是我有用萤光显微镜将E. coli涂在载玻片上後观察 用蓝光激发後发现会有微弱的绿色萤光存在，但是真的很微弱， 要用暗视野曝光20秒才拍得到 後来我用sonicator将菌打破後收集上清液，理论上应该可以观察到上清液 发出绿色萤光，因为会有native form的protein A-EGFP存在上清液中 结果是一样看不出绿色萤光 这边想请教大家是否有这方面的经验可以分享，是否会因为我前面接一段protein A 而影响到EGFP的beta barrel结构导致无法正确folding产生萤光 不过在上课时老师有提到不管EGFP N-ter.或C-ter.接上什麽蛋白，基本上都会发光 还是用DH5alpha表现的蛋白有比较大的机率被protease分解， 所以EGFP表现的量不足以用肉眼观察 以上，请教大家，谢谢了。 --

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