作者sloke (查無此人)
看板Biotech
標題[求救]in vitro transcription
時間Wed Jul 27 00:15:24 2011
最近在做 T7 及 Sp6 in vitro transcrption
可是產生出來的RNA 有的時候會出現2條以上的BAND
有實會出現比預期大小 大出很多的產物,請問版上大大
有人有遇過類似的問題嗎??
我的條件
DEPC ddH20
1ug 5' overhand template DNA
NEB RNA pol 10x buffer
80XrNTP
RNasin
T7 or Sp6 pol
總反應體積為5Oul 有時為了獲得大量RNA
會將所有東西等比例放大(EX: X3倍) 再分成每管50ul 共3管進行反應
T7於 37度反應3小時
Sp6於40度反應3小時
謝謝各位大大幫忙
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.120.97.162
1F：→ GauYi:污染？ 07/27 01:38
2F：→ prodsupt:template是plasmid or PCR product? 08/01 08:52
3F：→ prodsupt:如果是plasmid有可能是沒切乾淨才會有大很多的product 08/01 08:53
4F：→ prodsupt:PCR沒純化的話，也可能由template做出 08/01 08:55