作者sloke (查无此人)
看板Biotech
标题[求救]in vitro transcription
时间Wed Jul 27 00:15:24 2011
最近在做 T7 及 Sp6 in vitro transcrption
可是产生出来的RNA 有的时候会出现2条以上的BAND
有实会出现比预期大小 大出很多的产物,请问版上大大
有人有遇过类似的问题吗??
我的条件
DEPC ddH20
1ug 5' overhand template DNA
NEB RNA pol 10x buffer
80XrNTP
RNasin
T7 or Sp6 pol
总反应体积为5Oul 有时为了获得大量RNA
会将所有东西等比例放大(EX: X3倍) 再分成每管50ul 共3管进行反应
T7於 37度反应3小时
Sp6於40度反应3小时
谢谢各位大大帮忙
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.120.97.162
1F：→ GauYi:污染？ 07/27 01:38
2F：→ prodsupt:template是plasmid or PCR product? 08/01 08:52
3F：→ prodsupt:如果是plasmid有可能是没切乾净才会有大很多的product 08/01 08:53
4F：→ prodsupt:PCR没纯化的话，也可能由template做出 08/01 08:55