作者harvey (車輪蛋糕:))
看板Biotech
標題[求救] 透析膜
時間Fri Jun 24 22:42:37 2011
小弟有一批pichia表現的protein sup要作His select純化
原本想說sup過濾後通column即可 但和老師討論後瞭解應先透析後調整pH再過column
我的protein大概是14kDa 附近實驗室頂多能借到12KMWCO的透析膜
而朋友建議我用3.5kMWCO比較保險
不知道可否在台北哪邊化學材料行買到這樣的透析膜？
因為週末想收下sup通column不想拖到下禮拜
還是有好心的版大願意分我一些T_T 感激不盡~
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.131.9
1F：推 intotheman:8K or 3K能用嗎? 你sample大概多少量 06/25 01:35
3K應該是可以用 8K 朋友說有點危險 如果protein folding的形狀比較特別就可能透出去
(= =a雖然我有點存疑)
2F：推 yaprint:先透析是要去除鹽類嗎?還有請問調PH值的目的是什麼? 06/25 12:24
3F：→ yaprint:最近也在做差不多的實驗 嘻嘻! 06/25 12:24
老闆說用冰PBS透析後 protein(我的是growth factor)在緩衝液裡面比較穩定
調pH是要調到pH8 這樣過nickel column binding比較好
4F：推 boblu:好奇 先透析是何用意？ 06/25 12:44
5F：推 DMEM:透析是要除去lysis buf裡的物質嗎??? 06/25 15:29
恩..不是lysis buf耶 是yeast的supernatant
我想應該是要把一些yeast代謝廢物及氮源鹽類等減少(置換)成單純的PBS或ddH2O
以減少對nickel gel的干擾吧@@
※ 編輯: harvey 來自: 140.112.131.9 (06/25 17:03)
6F：→ yaprint:那在透析的過程，除了溫度低 要怎麼避免protein degrade? 06/25 18:11
7F：→ harvey:我有看過加protease inhibitor的protocol~ 06/25 20:49
8F：推 silverberry:農化新館這邊有 6-8K 的。1 cm 約 3 ml 06/28 19:51
9F：推 silverberry:志德國際的透析膜也不錯。google 一下~ 06/28 19:55
10F：→ silverberry:有現貨的老闆應該可以馬上幫你送~ 06/28 19:55
11F：推 chiisacat:之前收yeast sup也都沒透析直接過column 08/16 13:12