作者harvey (车轮蛋糕:))
看板Biotech
标题[求救] 透析膜
时间Fri Jun 24 22:42:37 2011
小弟有一批pichia表现的protein sup要作His select纯化
原本想说sup过滤後通column即可 但和老师讨论後了解应先透析後调整pH再过column
我的protein大概是14kDa 附近实验室顶多能借到12KMWCO的透析膜
而朋友建议我用3.5kMWCO比较保险
不知道可否在台北哪边化学材料行买到这样的透析膜？
因为周末想收下sup通column不想拖到下礼拜
还是有好心的版大愿意分我一些T_T 感激不尽~
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.131.9
1F：推 intotheman:8K or 3K能用吗? 你sample大概多少量 06/25 01:35
3K应该是可以用 8K 朋友说有点危险 如果protein folding的形状比较特别就可能透出去
(= =a虽然我有点存疑)
2F：推 yaprint:先透析是要去除盐类吗?还有请问调PH值的目的是什麽? 06/25 12:24
3F：→ yaprint:最近也在做差不多的实验 嘻嘻! 06/25 12:24
老板说用冰PBS透析後 protein(我的是growth factor)在缓冲液里面比较稳定
调pH是要调到pH8 这样过nickel column binding比较好
4F：推 boblu:好奇 先透析是何用意？ 06/25 12:44
5F：推 DMEM:透析是要除去lysis buf里的物质吗??? 06/25 15:29
恩..不是lysis buf耶 是yeast的supernatant
我想应该是要把一些yeast代谢废物及氮源盐类等减少(置换)成单纯的PBS或ddH2O
以减少对nickel gel的干扰吧@@
※ 编辑: harvey 来自: 140.112.131.9 (06/25 17:03)
6F：→ yaprint:那在透析的过程，除了温度低 要怎麽避免protein degrade? 06/25 18:11
7F：→ harvey:我有看过加protease inhibitor的protocol~ 06/25 20:49
8F：推 silverberry:农化新馆这边有 6-8K 的。1 cm 约 3 ml 06/28 19:51
9F：推 silverberry:志德国际的透析膜也不错。google 一下~ 06/28 19:55
10F：→ silverberry:有现货的老板应该可以马上帮你送~ 06/28 19:55
11F：推 chiisacat:之前收yeast sup也都没透析直接过column 08/16 13:12