作者mgh225 (..)
看板Biotech
標題[求救] RNase A treat
時間Thu Jun 23 12:39:25 2011
因為在 extract plasmid 並 digest 後， 跑電泳時 bands smear的很嚴重
老師認為應該是因為 RNA 沒有處理乾淨
所以叫我用 RNase A 去retreat
我看一般使用的 protocol 好像有說到 treat 完後要使用 PCI 才不會影響後續實驗
但是我接下來要做的是 gel extraction 和 ligation
那麼 PCI 的步驟是否還是必要的呢???
謝謝大家的指導
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◆ From: 140.112.79.51
1F：推 micocat:請問你是怎麼抽plasmid的 未加RE digest的DNA有smear嗎 06/23 13:28
2F：推 aceliang:看你是要切來幹麼的...其實RE digest時加Rnase也行 06/23 13:40
3F：推 Ianthegood:對阿我們都和在solution 1裡面 06/23 13:42
4F：→ Ianthegood:不過電泳應該就會把protein跑開了啦 06/23 13:42
5F：推 roy047:有做clean up 或是gel extraction 純化後即可 06/23 15:09
6F：→ roy047:不過抽的plasmid如果smear太嚴重的話.. 步驟應該也有問題@@ 06/23 15:10
7F：→ jimmyshen17:我怎麼覺得是RE digest的問題... 06/23 15:52
8F：→ mgh225:謝謝各位提供的意見 但RE不就加一加嗎 會可能有什麼問題呢 06/23 19:37
9F：推 aceliang:......是加一加沒錯啦...但是他在裡面作用問題可多了... 06/23 19:39
10F：→ a90648:PCR也是加一加啊!! 但是就是會P不出東西來，問題多的很... 06/24 00:58
11F：推 icome:建議用kit抽 現在mini都蠻便宜的 速度快品質也很穩定 06/24 21:16