作者CrossZippo (狼凰慈威)
看板Biotech
標題[求救] 利用Dot-Blot或Western等方法進行醣類免疫分析是否可行
時間Tue Jun 21 10:43:59 2011
想請問一下關於醣鏈要如何進行免疫檢測實驗的問題
因為最近我們需要測試一株抗體是否會認Sialyl Lweis x系列醣鏈
http://en.wikipedia.org/wiki/Sialyl_lewis_x
原本是使用Dot-Blot的方式 可是效果似乎不好
查了才發現我們用的PVDF membrane (0.45um)似乎孔徑太大
它建議的使用範圍是10-20kDa大小蛋白質
而另外一款(MILLIPORE Immobilon-PSQ 0.2um)建議的是<10kDa
但是我們的醣分子量只有820左右 離10kDa也是一大段距離 感覺也是會穿過去
想請問一下有在做醣類實驗的前輩們
一般進行這樣的實驗是使用什麼方式來進行?
(感覺ELISA的96 well盤可能也coat不太上去??)
大恩大德先謝過了!
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 203.71.94.31
1F：推 Ianthegood:DAS ELISA? 06/21 11:50
2F：→ CrossZippo:似乎可行 不過必須要有兩種不同但都可辨認相同醣的一抗 06/21 23:59
3F：→ CrossZippo:不然negative control會出現false positive(二抗會直接 06/22 00:01
4F：→ CrossZippo:接上第一層coating的一抗) 可惜目前我們只有一種一抗 06/22 00:02
5F：→ Ianthegood:serum多放一點? 不然一抗直接接ap? 06/22 11:49
6F：→ Ianthegood:而且elisa的靈敏度又沒有RTPCR那麼高 同時也是優點 06/22 11:52
7F：→ CrossZippo:我們的醣是買來的純醣溶於水中 再另外用抗體去認(基本 06/22 13:29
8F：→ CrossZippo:上就是在做western只是把蛋白質換成醣) 所以跟serum無 06/22 13:30
9F：→ CrossZippo:關喔 而且更不會牽扯到RTPCR @@" 現在遇到的問題只是 06/22 13:31
10F：→ CrossZippo:醣比蛋白質小很多 所以用一般western的方法會穿過PVDF 06/22 13:32
11F：→ Ianthegood:PCR是題外話 一抗直接接enzyme做detection? 06/22 18:24
12F：→ CrossZippo:嗯 基本上就是DAS-ELISA的方法了 的確是可行 不過目前 06/23 00:31
13F：→ CrossZippo:手邊現有的一抗只有一種 看來可能得找找有沒有其他同樣 06/23 00:35
14F：→ CrossZippo:能認SLeX醣的不同一抗 或直接在現有一抗接上enzyme的方 06/23 00:36
15F：→ CrossZippo:法了... 感謝您的回答與幫忙 :) 06/23 00:38
16F：→ CrossZippo:不過話說回來 如果能直接找到超小孔徑的membrane問題就 06/23 00:41
17F：→ CrossZippo:直接解決了 :p 可惜目前找到最小的也是0.2um... 06/23 00:41
18F：推 Ianthegood:JOURNAL OF CLINICAL MICROBIOLOGY, Apr. 1982, p. 737 06/23 08:34
19F：→ CrossZippo:感謝!! 來去研究看看 :) 06/23 22:07