作者CrossZippo (狼凰慈威)
看板Biotech
标题[求救] 利用Dot-Blot或Western等方法进行醣类免疫分析是否可行
时间Tue Jun 21 10:43:59 2011
想请问一下关於醣链要如何进行免疫检测实验的问题
因为最近我们需要测试一株抗体是否会认Sialyl Lweis x系列醣链
http://en.wikipedia.org/wiki/Sialyl_lewis_x
原本是使用Dot-Blot的方式 可是效果似乎不好
查了才发现我们用的PVDF membrane (0.45um)似乎孔径太大
它建议的使用范围是10-20kDa大小蛋白质
而另外一款(MILLIPORE Immobilon-PSQ 0.2um)建议的是<10kDa
但是我们的醣分子量只有820左右 离10kDa也是一大段距离 感觉也是会穿过去
想请问一下有在做醣类实验的前辈们
一般进行这样的实验是使用什麽方式来进行?
(感觉ELISA的96 well盘可能也coat不太上去??)
大恩大德先谢过了!
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 203.71.94.31
1F：推 Ianthegood:DAS ELISA? 06/21 11:50
2F：→ CrossZippo:似乎可行 不过必须要有两种不同但都可辨认相同醣的一抗 06/21 23:59
3F：→ CrossZippo:不然negative control会出现false positive(二抗会直接 06/22 00:01
4F：→ CrossZippo:接上第一层coating的一抗) 可惜目前我们只有一种一抗 06/22 00:02
5F：→ Ianthegood:serum多放一点? 不然一抗直接接ap? 06/22 11:49
6F：→ Ianthegood:而且elisa的灵敏度又没有RTPCR那麽高 同时也是优点 06/22 11:52
7F：→ CrossZippo:我们的醣是买来的纯醣溶於水中 再另外用抗体去认(基本 06/22 13:29
8F：→ CrossZippo:上就是在做western只是把蛋白质换成醣) 所以跟serum无 06/22 13:30
9F：→ CrossZippo:关喔 而且更不会牵扯到RTPCR @@" 现在遇到的问题只是 06/22 13:31
10F：→ CrossZippo:醣比蛋白质小很多 所以用一般western的方法会穿过PVDF 06/22 13:32
11F：→ Ianthegood:PCR是题外话 一抗直接接enzyme做detection? 06/22 18:24
12F：→ CrossZippo:嗯 基本上就是DAS-ELISA的方法了 的确是可行 不过目前 06/23 00:31
13F：→ CrossZippo:手边现有的一抗只有一种 看来可能得找找有没有其他同样 06/23 00:35
14F：→ CrossZippo:能认SLeX醣的不同一抗 或直接在现有一抗接上enzyme的方 06/23 00:36
15F：→ CrossZippo:法了... 感谢您的回答与帮忙 :) 06/23 00:38
16F：→ CrossZippo:不过话说回来 如果能直接找到超小孔径的membrane问题就 06/23 00:41
17F：→ CrossZippo:直接解决了 :p 可惜目前找到最小的也是0.2um... 06/23 00:41
18F：推 Ianthegood:JOURNAL OF CLINICAL MICROBIOLOGY, Apr. 1982, p. 737 06/23 08:34
19F：→ CrossZippo:感谢!! 来去研究看看 :) 06/23 22:07