作者karas888 (爆熱武者 無雙抖抖丸 )
看板Biotech
標題[討論] PCR技術
時間Sun Jun 12 16:48:17 2011
請教各位
PCR是一種利用熱對流循環的方式讓
微量DNA進行複製放大的效果對吧!!
在下找了一下資料
同樣都要經過熱對流
1.電泳法 (分離DNA分子量)
2.即時PCR(用螢光染劑 在熱對流的循環過程中隨次數增加發光強度越強)
查到的資料是說1是傳統的方式
會有操作汙染 以及成本較高 費時等的問題
所以發展用螢光染劑的方式的即時PCR
那我的疑問是 我看了幾篇PAPER到現在還是有使用電泳法
原因是什麼?
那電泳法最顯著的缺點右是什麼呢?我不太明白
以現今發展即時PCR用螢光染劑的方法不是很好嗎?
為何不淘汰掉費時而且成本較高的電泳法這項技術?
而全部改採螢光染劑的方式?
謝謝大家!!^^
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.120.80.19
1F：→ gryou:你想問的是 RT-PCR 與 qPCR的差別吧？定量的方式有差！ 06/12 17:28
2F：→ Realthugz:realtime可以定量同時看到dynamic 電泳沒辦法 06/12 17:58
3F：→ Realthugz:而且qPCT成本較高吧... 06/12 18:00
4F：→ Realthugz:*qPCR 06/12 18:00
5F：→ Realthugz:電泳還是便宜好用阿... cloning跟簡單定量 06/12 18:02
6F：→ karas888:還是不太懂 能不能用回文方式討論一下差別^^? 06/12 18:10
7F：→ Realthugz:你可能沒搞懂這些實驗怎麼做 data差異在哪 06/12 18:41
8F：→ Realthugz:PCR的溫度重點是酵素,primer跟DNA 不是甚麼對流 06/12 18:42
9F：→ Realthugz:我不知道你的資料是哪裡來的 請去看molecular cloning 06/12 18:43
10F：→ karas888:謝謝 我會去查詢的!! 06/12 19:42
11F：推 birdddd:我們隔壁實驗室的老師就是堅持用電泳定量基因的表現量 他 06/12 20:13
12F：→ birdddd:認為僅用偵測螢光量推斷基因表現是不準的 最好去搭電泳結 06/12 20:13
13F：→ birdddd:果(應使用BAND粗細與qPCR之Ct做再次確認) 但電泳定量的問 06/12 20:15
14F：→ birdddd:題是有太多變因會影響BAND粗細(ex混合load dye時.load膠時 06/12 20:17
15F：→ birdddd:.EtBr染色時間...變因很多) 目前qPCR用得還滿普遍的 06/12 20:18