作者karas888 (爆热武者 无双抖抖丸 )
看板Biotech
标题[讨论] PCR技术
时间Sun Jun 12 16:48:17 2011
请教各位
PCR是一种利用热对流循环的方式让
微量DNA进行复制放大的效果对吧!!
在下找了一下资料
同样都要经过热对流
1.电泳法 (分离DNA分子量)
2.即时PCR(用萤光染剂 在热对流的循环过程中随次数增加发光强度越强)
查到的资料是说1是传统的方式
会有操作污染 以及成本较高 费时等的问题
所以发展用萤光染剂的方式的即时PCR
那我的疑问是 我看了几篇PAPER到现在还是有使用电泳法
原因是什麽?
那电泳法最显着的缺点右是什麽呢?我不太明白
以现今发展即时PCR用萤光染剂的方法不是很好吗?
为何不淘汰掉费时而且成本较高的电泳法这项技术?
而全部改采萤光染剂的方式?
谢谢大家!!^^
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.120.80.19
1F：→ gryou:你想问的是 RT-PCR 与 qPCR的差别吧？定量的方式有差！ 06/12 17:28
2F：→ Realthugz:realtime可以定量同时看到dynamic 电泳没办法 06/12 17:58
3F：→ Realthugz:而且qPCT成本较高吧... 06/12 18:00
4F：→ Realthugz:*qPCR 06/12 18:00
5F：→ Realthugz:电泳还是便宜好用阿... cloning跟简单定量 06/12 18:02
6F：→ karas888:还是不太懂 能不能用回文方式讨论一下差别^^? 06/12 18:10
7F：→ Realthugz:你可能没搞懂这些实验怎麽做 data差异在哪 06/12 18:41
8F：→ Realthugz:PCR的温度重点是酵素,primer跟DNA 不是甚麽对流 06/12 18:42
9F：→ Realthugz:我不知道你的资料是哪里来的 请去看molecular cloning 06/12 18:43
10F：→ karas888:谢谢 我会去查询的!! 06/12 19:42
11F：推 birdddd:我们隔壁实验室的老师就是坚持用电泳定量基因的表现量 他 06/12 20:13
12F：→ birdddd:认为仅用侦测萤光量推断基因表现是不准的 最好去搭电泳结 06/12 20:13
13F：→ birdddd:果(应使用BAND粗细与qPCR之Ct做再次确认) 但电泳定量的问 06/12 20:15
14F：→ birdddd:题是有太多变因会影响BAND粗细(ex混合load dye时.load胶时 06/12 20:17
15F：→ birdddd:.EtBr染色时间...变因很多) 目前qPCR用得还满普遍的 06/12 20:18