作者starjim (Jim)
看板Biotech
標題[求救] RT遇到的問題
時間Wed Jun 8 20:10:13 2011
想請問板上的各位高手
因為我在做RT時，Oligo dT 和dNTP會先混在一起(各0.5ul)
接著再加1ul到各個sample
但現在遇到問題了
由於這次sample較多~因此在我各加完1 ul之後
發現混合的那管還剩下1ul，各個sample加完那1ul之後體績是6.5ul
因此我把pippet調成6.5ul去吸每個sample
發現都剛好~而我也確定我在配olgo dT+dNTP時沒有多配
那假如這部分有問題的話RT做出來會有什麼樣的影響??
謝謝~~
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 203.71.94.31
1F：推 Realthugz:體積這麼小 誤差很正常... 前提是你沒有少加一組就好了 06/08 20:54
2F：推 jk15:我覺得RT的成功與否跟RNA的quality比較有關... 06/08 23:03
3F：→ jk15:真的怕的話 pipet送去校正吧@@" 06/08 23:04
4F：→ shenhsu:一定會有誤差的..所以我們實驗室都是多配1管 省點就多半管 06/09 02:12
5F：→ shenhsu:每管加的量都一樣還有多 總比最後一管少了加不到來的好~ 06/09 02:13
6F：推 cocodo:沒有影響的，敝實驗室pipet的誤差都在2uL以上，還是可以RT 06/11 08:21
7F：→ cocodo:而且RNA quality比較重要，可以跑個internal control 的PCR 06/11 08:24
8F：→ cocodo:確認一下RNA qualiry 06/11 08:26
9F：→ cocodo:我是說RT之後的product 啾咪 06/11 08:28