作者popopig2000 (RICHMAN)
看板Biotech
標題Re: [求救] transfection efficiency normalize
時間Fri Jun 3 20:10:40 2011
※ 引述《popopig2000 (RICHMAN)》之銘言：
: 請問可以使用transfect進入細胞內plasmid上的ampicillin gene 來做normalize嗎?
: (i.e. 抽細胞total DNA, 同時也會抽到transfecｔ到細胞內的 plasmid DNA, 然後設計
: 一對primer, 用來amplify amp這個片段, 然後用real-time PCR, 來定
: 量normalize), 但文獻上似乎沒人用過這個方法, 大部分都是用co-transfect,
: 請問大家這個方法可行嗎? 謝謝^^
謝謝各位高手的回答
目前不選用co-transfect EGFP, renilla, firefly luciferase, pSEAP2 etc.的原因
是因為我的transfection efficiency是比較兩種不同細胞
(一個是ctrl,另一個是knockdown掉細胞內的一個gene)
怕上述那些plasmid的promoter (virus promoter:TK, CMV, SV40)activity
在gene被knockdown掉後會受到影響, 因此原先可能transfection efficiency
在兩種細胞沒差, 但在gene被knockdown掉那株, 由於virus promoter avitity較高
而使它的產物EGFP, luciferase, SEAP等較多, 造成誤以為轉染效率較佳,
且由於實驗主題是探討那個被knockdown掉的gene, 對virus replication的影響,
所以我transfect的plasmid是一個會產生HBV的plasmid,
因此我們想說假使那個gene真的會影響virus replication, 那它同時可能也會
影響co-transfect用來normalize plasmid內的virus promoter,
所以才想到這個方法.
謝謝各位朋友的解答, 萬分感激, 所以用ampicillin normalize這方法是可行的囉?
不過因為太麻煩所以沒人使用, 是這樣嗎?
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1F：推 icome:最好問一下老闆再做 版友畢竟不是你老闆... 06/03 21:23
2F：→ blence:其實可以找缺promoter pRL類,塞入EF-1a或U6及House keeping 06/04 13:32
3F：→ blence:gene,除非你看病毒複製也跟amp一樣都只收DNA,那才有方便到 06/04 13:36