作者popopig2000 (RICHMAN)
看板Biotech
标题Re: [求救] transfection efficiency normalize
时间Fri Jun 3 20:10:40 2011
※ 引述《popopig2000 (RICHMAN)》之铭言：
: 请问可以使用transfect进入细胞内plasmid上的ampicillin gene 来做normalize吗?
: (i.e. 抽细胞total DNA, 同时也会抽到transfecｔ到细胞内的 plasmid DNA, 然後设计
: 一对primer, 用来amplify amp这个片段, 然後用real-time PCR, 来定
: 量normalize), 但文献上似乎没人用过这个方法, 大部分都是用co-transfect,
: 请问大家这个方法可行吗? 谢谢^^
谢谢各位高手的回答
目前不选用co-transfect EGFP, renilla, firefly luciferase, pSEAP2 etc.的原因
是因为我的transfection efficiency是比较两种不同细胞
(一个是ctrl,另一个是knockdown掉细胞内的一个gene)
怕上述那些plasmid的promoter (virus promoter:TK, CMV, SV40)activity
在gene被knockdown掉後会受到影响, 因此原先可能transfection efficiency
在两种细胞没差, 但在gene被knockdown掉那株, 由於virus promoter avitity较高
而使它的产物EGFP, luciferase, SEAP等较多, 造成误以为转染效率较佳,
且由於实验主题是探讨那个被knockdown掉的gene, 对virus replication的影响,
所以我transfect的plasmid是一个会产生HBV的plasmid,
因此我们想说假使那个gene真的会影响virus replication, 那它同时可能也会
影响co-transfect用来normalize plasmid内的virus promoter,
所以才想到这个方法.
谢谢各位朋友的解答, 万分感激, 所以用ampicillin normalize这方法是可行的罗?
不过因为太麻烦所以没人使用, 是这样吗?
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◆ From: 163.25.118.174
1F：推 icome:最好问一下老板再做 版友毕竟不是你老板... 06/03 21:23
2F：→ blence:其实可以找缺promoter pRL类,塞入EF-1a或U6及House keeping 06/04 13:32
3F：→ blence:gene,除非你看病毒复制也跟amp一样都只收DNA,那才有方便到 06/04 13:36