作者popopig2000 (RICHMAN)
看板Biotech
標題[求救] transfection efficiency normalize
時間Thu Jun 2 15:59:57 2011
請問可以使用transfect進入細胞內plasmid上的ampicillin gene 來做normalize嗎?
(i.e. 抽細胞total DNA, 同時也會抽到transfecｔ到細胞內的 plasmid DNA, 然後設計
一對primer, 用來amplify amp這個片段, 然後用real-time PCR, 來定
量normalize), 但文獻上似乎沒人用過這個方法, 大部分都是用co-transfect,
請問大家這個方法可行嗎? 謝謝^^
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◆ From: 163.25.94.72
1F：推 iceking:不行,amp不會表現,不能用來normalize 06/02 22:09
2F：推 johanjohan:應該會不準 因為每個細胞吃到的plasmid數量不同 06/02 22:26
3F：→ blence:原po以amp片段代表進入細胞的plasmid量,樓樓上何以不行? 06/02 22:30
4F：→ blence:transfection的目的不一定看protein,RNA表現,也有人偵測DNA 06/02 22:34
5F：→ blence:只是像luc實驗單純看protein表現的話,還要realtime太麻煩了 06/02 22:38
6F：推 johanjohan:同意b大 06/02 22:42
7F：推 leoblack:我也不懂為什麼不行?!要定量的是plasmid不是蛋白耶~ 06/02 23:21
8F：推 icome:沒看過有人這樣做 我想是因為GFP已經很方便了 06/03 13:43
9F：→ rimeni:效率最準應該是免疫染色後上flow或直接在顯微鏡下算% 06/03 14:28
10F：→ popopig2000:謝謝各位高收的幫忙解答 06/03 19:45
11F：→ popopig2000: 手 06/03 20:11
12F：→ popopig2000: 手 06/03 20:11
13F：→ sxsodium:跳痛一下...不能用eGFP做同樣的事嗎??? 06/09 00:09