作者popopig2000 (RICHMAN)
看板Biotech
标题[求救] transfection efficiency normalize
时间Thu Jun 2 15:59:57 2011
请问可以使用transfect进入细胞内plasmid上的ampicillin gene 来做normalize吗?
(i.e. 抽细胞total DNA, 同时也会抽到transfecｔ到细胞内的 plasmid DNA, 然後设计
一对primer, 用来amplify amp这个片段, 然後用real-time PCR, 来定
量normalize), 但文献上似乎没人用过这个方法, 大部分都是用co-transfect,
请问大家这个方法可行吗? 谢谢^^
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 163.25.94.72
1F：推 iceking:不行,amp不会表现,不能用来normalize 06/02 22:09
2F：推 johanjohan:应该会不准 因为每个细胞吃到的plasmid数量不同 06/02 22:26
3F：→ blence:原po以amp片段代表进入细胞的plasmid量,楼楼上何以不行? 06/02 22:30
4F：→ blence:transfection的目的不一定看protein,RNA表现,也有人侦测DNA 06/02 22:34
5F：→ blence:只是像luc实验单纯看protein表现的话,还要realtime太麻烦了 06/02 22:38
6F：推 johanjohan:同意b大 06/02 22:42
7F：推 leoblack:我也不懂为什麽不行?!要定量的是plasmid不是蛋白耶~ 06/02 23:21
8F：推 icome:没看过有人这样做 我想是因为GFP已经很方便了 06/03 13:43
9F：→ rimeni:效率最准应该是免疫染色後上flow或直接在显微镜下算% 06/03 14:28
10F：→ popopig2000:谢谢各位高收的帮忙解答 06/03 19:45
11F：→ popopig2000: 手 06/03 20:11
12F：→ popopig2000: 手 06/03 20:11
13F：→ sxsodium:跳痛一下...不能用eGFP做同样的事吗??? 06/09 00:09