作者donnasafin (..)
看板Biotech
標題[求救] 蛋白質表現很低
時間Tue May 24 17:21:27 2011
各位前輩們好
小弟我卡在蛋白質表現量低好一陣子了
protein是接在pRSET-B帶有 his-tag 送進去 BL21(DE3)作表現
條件是37度的culture，OD 0.4 ~ 0.6 + 1mM的IPTG induction
一開始小量表現量正常，之後再重新養菌以同樣條件下去作
我要的蛋白質表現量越來越少，到現在幾乎是沒有了
由於實驗目的需要的蛋白質量要到mg等級的量
想請問各位前輩有什麼解決的方法
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◆ From: 140.117.91.9
1F：推 dodomilk:有很多種方法...但都不一定有用... 05/24 17:32
2F：→ shenhsu:會越來越少 就只好再從前面表現正常的stock畫菌出來養了 05/24 18:25
3F：推 batatas:可能是菌loss掉plasmid 05/24 18:49
4F：→ donnasafin:有考慮過菌loss掉我要的東西，重新transform表現量 05/24 19:00
5F：→ donnasafin:一樣很低 @@ 05/24 19:00
6F：推 batatas:看LB IPTG 和抗生素有沒有問題 05/24 21:39
7F：→ inchew:你是指隨著繼代太多次後而變少還是隨著induction時間越長 05/27 14:57
8F：→ inchew:而逐漸變少(跑膠看)?請確保stock多凍幾管不要一直繼代，還 05/27 14:59
9F：→ inchew:有我覺得你可以多試不同induction，如溫度降至30,25,28度、 05/27 15:00
10F：→ inchew:試不同induction時數、start OD、或是換表現buffer...etc 05/27 15:01