作者donnasafin (..)
看板Biotech
标题[求救] 蛋白质表现很低
时间Tue May 24 17:21:27 2011
各位前辈们好
小弟我卡在蛋白质表现量低好一阵子了
protein是接在pRSET-B带有 his-tag 送进去 BL21(DE3)作表现
条件是37度的culture，OD 0.4 ~ 0.6 + 1mM的IPTG induction
一开始小量表现量正常，之後再重新养菌以同样条件下去作
我要的蛋白质表现量越来越少，到现在几乎是没有了
由於实验目的需要的蛋白质量要到mg等级的量
想请问各位前辈有什麽解决的方法
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.117.91.9
1F：推 dodomilk:有很多种方法...但都不一定有用... 05/24 17:32
2F：→ shenhsu:会越来越少 就只好再从前面表现正常的stock画菌出来养了 05/24 18:25
3F：推 batatas:可能是菌loss掉plasmid 05/24 18:49
4F：→ donnasafin:有考虑过菌loss掉我要的东西，重新transform表现量 05/24 19:00
5F：→ donnasafin:一样很低 @@ 05/24 19:00
6F：推 batatas:看LB IPTG 和抗生素有没有问题 05/24 21:39
7F：→ inchew:你是指随着继代太多次後而变少还是随着induction时间越长 05/27 14:57
8F：→ inchew:而逐渐变少(跑胶看)?请确保stock多冻几管不要一直继代，还 05/27 14:59
9F：→ inchew:有我觉得你可以多试不同induction，如温度降至30,25,28度、 05/27 15:00
10F：→ inchew:试不同induction时数、start OD、或是换表现buffer...etc 05/27 15:01