作者telesa (空白)
看板Biotech
標題Re: [求救] 請教關於蠟切與凍切問題~
時間Sun May 22 23:53:12 2011
※ 引述《yussing (藍色天空)》之銘言：
: ※ 引述《mzac1b (Goodday)》之銘言：
: : 發問時請注意，若是要問實驗相關的問題，請將實驗的步驟、所用的條件大致列出
: : 以方便板友幫您追蹤問題
: : ----請將上列注意事項以 ctrl + k 刪除後開始編輯文章----
: : 想請教高手兩個問題~~
: : 1.一般拿來乘載組織的玻片通常有coating東西
: : 這樣的玻片可以 reuse 嗎?
: : 我是說當你切完片或染完觀察
: : 發現不滿意於是
: : 把玻璃片上的組織洗掉
: : 再重新接組織
: : 我個人經驗是處理冰凍切片的組織
: : reuse 似乎影響不大
: : 不知處理蠟切實玻片 reuse 會不會有影響?
: : 2.冰凍切片的脂肪組織可以進行 Oil Red O染色嗎?
: : 雖然看到文獻有用 Oil Red O 染組織上的部分脂肪
: : 但我剛試染整塊脂肪 (幾乎九成以上是油脂)
: : 切片 (切片厚度: 14micro meter)
: : 似乎油滴會飄起 (已先福馬林固定過)
: : 而且油會混在一起
: : 難以得到完整型態的染色結果
: : 所以我有點打算放棄這個實驗
: : 因為很難染得完整
: : 有人有染過或是否知道好染的方法嗎?
: : 感謝不吝賜教~
我不太懂怎樣的情況算是油混在一起?
是指看起來一整片糊糊的嗎?
我之前也試了很久，真的很難做得好，
很容易整片lipid變成糊的或者是lipid染不上(可能細胞破了使lipid不見了?)
我的感覺是，切片要先想辦法切完整，可以邊切時邊用顯微鏡稍微看一下白片
另外染完要封片(用水溶性膠)，不然等水分蒸發後,整個看起來都會是糊的
另外，過程中亦不能用力壓玻片，會把lipid壓碎，整個tissue看起來會很髒
不知道我的觀察是否正確，希望有其他強者能幫忙，謝謝
: 我之前做大鼠脂肪肝model的實驗,
: 讀了一些paper, 也有請教過病理科醫師,
: 因為福馬林會溶解tissue內的油滴,
: 所以會建議用冷凍切片的方式染Oil red觀察.
我記得...福馬林不會溶解lipid，有機溶劑才會
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◆ From: 122.121.214.88
1F：推 mzac1b:原本屬於兩個細胞的油 混在一起 甚至無法在原位置上 亂飄 05/23 15:32
2F：→ mzac1b:細胞交界的格子還在原地 但油飄得亂糟糟 難以呈現美感 05/23 15:33
3F：→ mzac1b:t 大已經建立能染得漂亮的技術嗎? 我真的很想學一下~~ 05/23 15:34
4F：→ telesa:其實不算建立...我的成功率也不到50%...而且看起來我遇 05/23 23:43
5F：→ telesa:到的問題跟你的很像 05/23 23:43
※ 編輯: telesa 來自: 122.121.209.47 (05/23 23:55)
6F：→ dragon49:我也是油都會糊一起 05/27 16:40