作者telesa (空白)
看板Biotech
标题Re: [求救] 请教关於蜡切与冻切问题~
时间Sun May 22 23:53:12 2011
※ 引述《yussing (蓝色天空)》之铭言：
: ※ 引述《mzac1b (Goodday)》之铭言：
: : 发问时请注意，若是要问实验相关的问题，请将实验的步骤、所用的条件大致列出
: : 以方便板友帮您追踪问题
: : ----请将上列注意事项以 ctrl + k 删除後开始编辑文章----
: : 想请教高手两个问题~~
: : 1.一般拿来乘载组织的玻片通常有coating东西
: : 这样的玻片可以 reuse 吗?
: : 我是说当你切完片或染完观察
: : 发现不满意於是
: : 把玻璃片上的组织洗掉
: : 再重新接组织
: : 我个人经验是处理冰冻切片的组织
: : reuse 似乎影响不大
: : 不知处理蜡切实玻片 reuse 会不会有影响?
: : 2.冰冻切片的脂肪组织可以进行 Oil Red O染色吗?
: : 虽然看到文献有用 Oil Red O 染组织上的部分脂肪
: : 但我刚试染整块脂肪 (几乎九成以上是油脂)
: : 切片 (切片厚度: 14micro meter)
: : 似乎油滴会飘起 (已先福马林固定过)
: : 而且油会混在一起
: : 难以得到完整型态的染色结果
: : 所以我有点打算放弃这个实验
: : 因为很难染得完整
: : 有人有染过或是否知道好染的方法吗?
: : 感谢不吝赐教~
我不太懂怎样的情况算是油混在一起?
是指看起来一整片糊糊的吗?
我之前也试了很久，真的很难做得好，
很容易整片lipid变成糊的或者是lipid染不上(可能细胞破了使lipid不见了?)
我的感觉是，切片要先想办法切完整，可以边切时边用显微镜稍微看一下白片
另外染完要封片(用水溶性胶)，不然等水分蒸发後,整个看起来都会是糊的
另外，过程中亦不能用力压玻片，会把lipid压碎，整个tissue看起来会很脏
不知道我的观察是否正确，希望有其他强者能帮忙，谢谢
: 我之前做大鼠脂肪肝model的实验,
: 读了一些paper, 也有请教过病理科医师,
: 因为福马林会溶解tissue内的油滴,
: 所以会建议用冷冻切片的方式染Oil red观察.
我记得...福马林不会溶解lipid，有机溶剂才会
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 122.121.214.88
1F：推 mzac1b:原本属於两个细胞的油 混在一起 甚至无法在原位置上 乱飘 05/23 15:32
2F：→ mzac1b:细胞交界的格子还在原地 但油飘得乱糟糟 难以呈现美感 05/23 15:33
3F：→ mzac1b:t 大已经建立能染得漂亮的技术吗? 我真的很想学一下~~ 05/23 15:34
4F：→ telesa:其实不算建立...我的成功率也不到50%...而且看起来我遇 05/23 23:43
5F：→ telesa:到的问题跟你的很像 05/23 23:43
※ 编辑: telesa 来自: 122.121.209.47 (05/23 23:55)
6F：→ dragon49:我也是油都会糊一起 05/27 16:40